应用反向线点杂交技术鉴定临床常见曲霉属和毛霉目真菌.pdfVIP

应用反向线点杂交技术鉴定临床常见 曲霉属和毛霉目真菌 赵作涛 李 丽丽 王晓阳 万喆 陈伟 李若瑜 北京大学第一医院皮肤性病科，北京大学真菌和真菌病研究中心，北京 100034 [摘要] 目的应用反 向线点杂交技术(reverse hybridization，RLB)快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌。lineblot 方法 收集我院真菌和 真菌病研究中心保存 的5种曲 霉菌（烟曲霉、黄曲 霉、黑曲霉、土曲 霉、构巢曲霉）和7种毛霉目真菌 （冻土毛霉菌、总状毛霉菌、卷枝毛霉菌、少根根霉、小孢根霉、微小根毛霉、伞状犁头霉），共计98株菌株。利用真菌通用引 物 ITS1和ITS4对菌 株进 行PCR扩增 ， 用12个真 菌 种特 异性 探 针与 扩增 后 产物 进行 反 向线 点杂 交 。将 RLB结果与 真 菌传 统形 态 学鉴 定结 果 、ITS区DNA测序 结果 进 行比 较。 结 果 RLB可以 正确 鉴定 98株实 验菌 株 ，与 形态 学 方法和ITS区测序 方法鉴定结果 100％一 致，种特异性探针之 间未见交叉杂交， 显示出该方法的高 度敏感性和特异性。 8株阴性 对照菌株（白 念珠菌、茄病镰刀菌、尖端赛多孢、马尔尼菲青霉、疣状瓶霉、棒曲霉、日本曲霉以及雅致小克银汉霉），使用RLB方法无法鉴 定 。 通 过 烟 曲霉 基 因组 DNA浓度10倍倍比 稀释 法 验证 RLB的敏感 性 为1.8×10-3 ng/μL。结论 RLB技术为 实验 室 早期 快速诊断、鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌提供参考。 曲霉；毛霉；PCR；反向线点杂交 R379.6;R379.9 A 1673-3827 2011( 05-0261-06) Simultaneous identification andreverseSimultaneousspeciesoflinebyAspergillusblotMucoralesidentification(RLB) hybridization hybridizationassay ZHAO Zuo-tao LILi-li WANG Xiao-yangWAN Zhe CHEN Wei LIRuo-yu 卫生部公益 基金( 200802026)，北京大学第一医院青年基金 赵作涛，男（汉族）,博士，助理研究员.E-mail: comyahoo.zhaozuotao@ 公司。 记、引物 3讨 论 的临床应用前景。 @@[12]王晓阳，赵作涛，李若瑜.深部念珠菌感染的诊断进展[J]. 中国真菌学杂志，2008，3(6):368-371. @@[ 1SternHighHagenD,etH,Porter EA,fungalrateinvasiveal.]of @@[13] @@[13]F,Bialekal.J,R,Kernidentificationbased etKonradPCR followinginfections transplantationallogeneicnonmyeloablative and discrimination of agents of andagentsofinaspergillosismucormycosis discriminationand [J]. Clin Infect Dis, 2003, 36(1) : 9-15. Dis,Infect2003,[J].36(1):Clin JPathol,paraffinembeddedClin2005,58　].wax