多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分.pdf

生物工程学报 Chin J Biotech 2009, January 25; 25(1): 139-146 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ? 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 生物技术与方法 多重实时荧光 PCR 检测牛、山羊和绵羊源性成分 曾少灵, 秦智锋, 阮周曦, 花群义, 卢体康, 吕建强, 陈书琨, 曹琛福, 张彩虹, 孙洁, 陈兵, 吴绍精 深圳出入境检验检疫局, 深圳 518045 摘 要: 根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素 b 基因序列, 设计特异性引物和以不同荧光素标记的 Taqman 探针。通过 对 PCR 反应体系和反应条件的优化筛选, 建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光 PCR 方法。采用本 文方法与国标 GB/T 20190-2006 方法分别对 17 种不同源性动物 DNA 和 200 份不同来源样品 DNA 进行牛羊源性成分检 测, 数据显示两者检测结果符合率达 100%, 特异性相当。与国标方法相比, 本试验方法不需电泳、酶切和测序, 即可在 一个 PCR 反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊 3 种源性成分, 检测效率提高近 3 倍; 灵敏度更高, 比国标方法灵敏 10 倍; 适用性更广, 除了饲料, 还适用于肉品、奶品、生皮和动物油脂等动物产品的牛羊源性成分检测。 关键词: 细胞色素 b 基因, 多重实时荧光 PCR, 牛、山羊和绵羊源性成分 Multiplex fluorescent real-time PCR detection of bovine, goat and sheep derived materials in animal products Shaoling Zeng, Zhifeng Qin, Zhouxi Ruan, Qunyi Hua, Tikang Lu, Jianqiang Lü, Shukun Chen, Chenfu Cao, Caihong Zhang, Jie Sun, Bing Chen, and Shaojing Wu Shenzhen Entry-exit Inspection Quarantine Bureau, Shenzhen 518045, China Abstract: We designed the specific primers and TaqMan probes targeting cytochrome b genes of mitochondrial DNA from bovine, goat and sheep. We used different fluorescents to label the probes. After optimization of reaction conditions, we set up a multiplex fluorescent real-time PCR method to detect bovine, goat and sheep der