生化检测原理讲解.pptx

第二部分：Spectrophotometry Principle 分光光度法检测原理 ;所以： 待测物浓度可以由检测其颜色深浅得到。;分光光度法的原理基础：Lambert-Beer Law;Lambert-Beer Law的适用范围：;为什么需要平行单色光？;为什么仅适用一定范围内？;前分光模式;后分光模式;双波长模式;分光光度法的分析类型;1Point End：仅检测反应终点的吸光度;2-point end assay :检测2个点的吸光度，一点反应启动前样品空白的吸光度，另一点为反应启动后的吸光度。;2-Point End Assay反应图：;2-Point Rate Assay：检测两个不同时间点之间的吸光度之差，除以时间差得到的变化率;2-point Rate assay反应图;1个或多个反应试剂 通过最小二乘法计算反应曲线，得到待测物的量或活性 ;Rate A反应图：;检测方法;光度分析校准及报警;Calibration quality criteria校准限制界面;校准报告CHO;SD Limit(标准差限制):常见校准校准失败的原因;Duplicate limit :重复性限制;Sensitivity limit(灵敏度限制) ;Sensitivity limit(灵敏度限制):常见校准校准失败的原因;校准失败;校准报警;常见报警类型;校准报警;生化项目检测常用显色指示系统; 1，NAD+－NADH（NADP+－NADPH）指示系统： 反应原理 ： NADH 和 NADPH 在 340nm 有特征性吸收峰，而 NAD+和 NADP+在 340nm无特征性吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据 340nm 吸光度的变化，可以测定物质的浓度或 活性。 临床项目： ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH 、 Glu（己糖激酶法）、UREA、NH4+ 、CO2 等 1.5.2.2. 举例说明 ALT的测定原理（IFCC） 试剂成分和反应公式： R1： NADH 、乳酸脱氢酶（LDH）； R2： L-丙氨酸 、α-酮戊二酸 。 原理：NADH 的减少，引起 340nm 吸光度的下降，下降速率与 ALT 活性成正比(酶动力学法)。;2，p-NP（磷酸对硝基苯酚）和 p-NA（硝基苯酚）指示系统 反应原理： p-NP 和 p-NA 在 405nm 有特征性吸收峰，根据 405nm 吸光度的变化，可以测定物质的浓 度或活。 临床项目： ALP、ACP、r-GT、AMY 等。 举例说明 ： ALP的测定原理（IFCC） 试剂成分和反应公式。 R1：AMP 缓冲液，镁离子，锌离子，PH＝10.44； R2：对硝基苯磷酸，防腐剂，PH＝8.5 原理：在镁离子和锌离子的存在下，碱性磷酸酶解离对硝基苯磷酸形成磷酸盐和对硝基苯酚， 引起 405nm 吸光度的上升，上升速率与 ALP 活性成正比（动力学法）。 ;3，H2O2偶联的指示系统 反应原理： H2O2在过氧化物酶的作用下，可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素，导致某 一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性。 临床项目：过氧化物酶法 CHOL，GLU 举例说明: GLU 过氧化物酶法的测定原理 R1：4-氨基安替吡啉 、抗坏血酸氧化酶 R2：葡萄糖氧化酶（GOD）、过氧化物酶（PO D）、酚 。 测定原理：醌亚胺的生成，导致 500nm 吸光度的增加，增加的程度与 Glu 的含量成正比。;4，抗原抗体反应指示系统，免疫比浊法 反应原理： 特异性抗体与抗原(待测物质)在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一定的浊 度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比。 临床项目： apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、 C4、CRP 等。 ;5，其它显色反应 TP 的反应原理 ： 蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，导致 540nm 吸光度的增 加，增加的程度与蛋白质的含量成正比。 ALB 的反应原理： 在 pH4.2 环境中，溴甲酚绿在有非离子去垢剂聚氧乙烯月桂存在时，可与白蛋白形成蓝绿色复合物，导致 630nm 吸光度的增加，增加的程度与白蛋白的含量成正比。 其它的显色