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第五章 植物的花药和花粉培养 (一)、 概念及意义1．概念花药培养其外植体是植物雄性生殖器官的一部分，就培养方法和技术来讲，属于器官培养的范畴。花粉培养的精确定义是：将处于一定发育阶段的花粉从花药中分离出来，再加以离体培养。有时花粉培养也称为小孢子培养(microspore culture)。从培养方法和技术方面来讲，它属于细胞培养的范畴。 2．单倍体植物的特点所谓单倍体(haploid)是指具有配子体染色体数的孢子体(植物个体)。单倍体植物有三个明显的特点：· 体细胞染色体数减半；生长发育弱，体形小、各器官明显减小；雌雄配子严重败育，有的甚至不能进入有性世代。3．单倍体的应用潜力· 迅速获得纯合型材料，缩短育种年限· 获得育种中间材料· 与诱变育种相结合可以提高诱变频率· 与细胞融合相结合更具有实际应??意义· 作为遗传工程受体更为有效· 用作基础遗传研究的各个领域 (二)、花药培养花药培养的基本程序是：外植体选择－外植体(花蕾)预处理—外植体消毒—剥取花药—接种—诱导培养—分化培养 (三)、花粉及小孢子培养1．取材时期的确定2．花粉或小孢子的分离3．培养方法  ·花药看护培养 ·花粉悬浮培养 ·双层培养(四)、单倍体植株的鉴定与二倍化1．鉴定方法：形态学鉴定 染色体分析2．单倍体植株的二倍化：继代加倍 创伤法加倍 秋水仙素处理加倍 第六章植物器官和组织培养 器官培养（Organ culture ） 植物某一器官的全部或部分或器官原基的离体培养，包括根、茎、叶、花、果实、种子等。 组织培养（Tissue culture） 指形成层组织、分生组织、表皮组织、薄壁组织和各种器官组织以及愈伤组织的培养。 一、茎的培养 1、类型 茎尖培养：10-100?m的茎尖分生组织 茎段培养：带有腋(侧)芽或叶柄、长几厘米的茎节段进行离体培养（快繁） 嫩茎段常作为快速繁殖的外植体 2、作用 无性系快速繁殖； 培养无病毒苗，品种改良； 理论基础研究。 3、建立无菌材料及培养 将经过表面消毒的茎段在无菌条件下，切成几厘米长带节的节段，接种在固体培养基上。经过培养后，在茎段可直接发生不定芽，或先诱导形成愈伤组织，再脱分化形成再生苗。把再生苗进行切割，转接到生根培养基上培养，便可得到完整的小植株。 4、茎的培养发育方向 腋芽萌发 脱分化后产生胚状体 脱分化后直接产生不定器官 脱分化后形成愈伤组织 5、影响发育方向的因素 外植体大小：微形外植体或分生组织易产生愈伤组织 培养条件：温度，光照 培养基生长调节剂种类和浓度：细胞分裂素和生长素的配比。 二、根的培养 在离体根培养中，自然条件下生长在土壤中的根要解决消毒问题是非常困难的，常用无菌苗的根作为培养材料。 根的培养过程： 种子常规表面消毒，在无菌条件下在培养基上萌发。 从根尖一端切取10 mm长接种于固体培养基中。 暗条件下培养侧根发生，可以切下侧根的根尖作为新的培养材料再进行扩大培养。 三、叶的培养 很多植物的叶片具有很强的再生能力，可以作为外植体。 基本培养过程： 取叶片 表面消毒 平放在固体培养基上培养 大多植物的叶组织在离体培养条件下先形成愈伤组织，再分化出胚状体、茎、叶和根。 第七章 植物愈伤组织培养 第一节 外植体的制备 1.一般植物组织都能诱发愈伤组织。 材料必须完全无菌 外植体的大小 第二节 愈伤组织的 培养 一、培养基 基本培养基只有部分植物组织能够培养和维持下去，大多数组织需要添加各种各样的附加物，如维生素、氨基酸、糖醇，生长素、细胞分裂素等。 二、愈伤的培养方式： 培养分为固体和液体培养两大类。 三、培养条件 1、光照：愈伤组织的诱导需弱光或不需光，分化需光。继代培养一般需光。 2、温度：一般采用24～28℃的恒温条件进行。 3、湿度：较大，以免引起培养基干缩。 第三节 愈伤组织形态的发生 愈伤组织培养物在某些条件下，可以再分化产生不定芽或根的分生组织甚至是胚状体，这些有结构的组织发育成苗。 一 、愈伤组织形态发生的途径 1.器官的形成 在分化时，愈伤组织的表层和内部都可形成分生中心。芽多发生在愈伤组织的表层，属外起源。 根发生在组织的深处，与整体植株发生类似，是内起源。 2.体细胞胚的发生 愈伤组织 体细胞胚 植株 二、激素对愈伤组织分化的影响 植物生长调节物质在分化过程中的作用是极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官分化中起着重要的作用。 器官分化的植物激素控制理论 大多数植物组织或器官的再生