植物组织培养—第一章.ppt

第一章 实验室与基本操作;第一节 实验室及其基本设备;;一、准备室 作用：材料、培养器械的清洗、培养基准备、灭菌等的准备工作。 普通化学实验室：仪器及设备、化学药品。 纯水仪、冰箱、移液枪、过滤灭菌器、电炉、微波炉、磁力搅拌器、低速台式离心机、电脑等 。 作用：配制培养基。 洗涤室：清洗、贮存器皿设施、鼓风干燥箱等。 作用：玻璃器皿、用具和培养材料的洗涤。;自动双重纯水蒸馏器;灭菌室： 高压蒸气灭菌装置：如立式、卧式和手提式灭菌器。 作用：培养基、器械、棉塞、无菌纸等灭菌消毒 ;细菌过滤器;二、无菌操作室 ;超净工作台 (a laminar flow hood) ;三、培养室 ;培养细胞或组织的各种器皿;1;四、细胞学实验室： 作用：细胞学和组织学观察。 需备有高倍显微镜、体视显微镜、倒置显微镜、各种相机、恒温箱、切片机、恒温水浴、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片等。;五、温室：;第二节 基本操作;二、灭菌方法：;过滤灭菌： 使溶液通过夹有微孔滤膜的漏斗，滤膜孔径需选用0.3～0.45μm。在无菌环境下，用真空泵抽滤，其滤液为无菌。液体培养（不耐高温活性物质） 药剂灭菌： 用70～75%酒精、0.1～0.2%升汞、10%的次氯酸钠、新洁尔灭、Clorox等药剂灭菌的方法。培养材料灭菌。 烧灼灭菌： 用酒精灯烧灼达到灭菌的目的。接种器具灭菌。 射线灭菌： 用紫外线照射的方法灭菌。照射时间一般为15～30min。接种时应关闭紫外灯。室内灭菌。;三、无菌操作：;第三节 培养基的配置;1、无机盐(inorganic elements)——大量元素和微量元素 大量元素 N：用量最多。常用的有硝态氮和铵态氮，KNO3、NH4NO3植物组织 从培养基中吸收氮后形成蛋白质。 P：在植物组织培养在的细胞增殖分化大量需要。主要从NaH2PO4、 KH2PO4供应。磷参与核酸、能量代谢。 K：直接影响培养物中酶的活性。主要由KCl、KNO3或KH2PO4供应。 Ca、S、Mg： CaCl2、Ca(NO3)2作为Ca来源，MgSO4作为S和Mg的来源。;微量元素 主要包括Fe、Mn、Zn、B、Mo、Cu、Cl、Co、I等。 植物对这些元素需要量甚微，稍多会发生毒害。 Fe是用量较多的一种微量元素，对组织中叶绿素的合成和延伸生长起重要作用。 铁常以FeSO4和乙二胺四乙酸钠(Na2-EDTA)的螯合物存在于培养基中。;2、 有机化合物（organic compounds) ;维生素类;③有机含氮化合物 氨基酸：常用的为：甘氨酸及酰胺类物质。 如谷氨酰胺（Glutamine），天冬酰胺和多种氨基酸混合物。水解乳蛋白（Lactalbumin hydrolysate, LH）、水解酪蛋白（Casein hydrolysate，CH）。 ;3、植物生长调节物质;赤霉素（GA3）、脱落酸（ABA）和多效唑（PP333）等生长调节物质也在组织培养中应用。 GA3—主要用于促进试管苗的生长。 ABA—体胚的发育成熟。 PP333—促进壮苗。 在组织培养中，生长素的主要作用是诱导外植体脱分化产生愈伤组织及促进培养物生长，诱导根器官的分化。 细胞分裂素的主要作用是促进细胞的分裂和分化，诱导不定芽和胚状体的分化和形成，延缓组织衰老，增加蛋白质合成。 ;4、 附加物类;⑤ 马铃薯萃取液：多用于壮苗的培养，在使用时可将马铃薯去皮、切碎、水煮20一30分钟，然后将滤液加入培养基中，其用量通常为100—200g/L。当培养基中添加了马铃薯萃取液后，可以对pH产生缓冲作用，试管苗也生长得更为健壮。 ⑥香蕉：多用于兰花的组织培养，将成熟香蕉果肉捣烂后，添加到培养基中，用量150—200g/L。香蕉果泥可缓冲培养基的pH，对外植体的分化有着较为明显的促进作用。 ⑦椰乳：Coconut milk, CM。用于较难培养的植物材料的培养基中。可将椰子的液态胚乳取出、或高压灭菌，或无菌过滤。使用浓度100-200mL／L。 ;二、培养基的种类;（二）培养基按试验目的分为： 诱导培养基，继代培养基，分化培养基，生根培养基。;分化培养： 由愈伤组织诱导形成小苗（幼芽或胚状体）的培养基。 ① 不加任何激素的基本培养基，即可诱导分化。如水稻、珍珠粟、甘蔗等植物。 ② 加较高浓度细胞分裂素和少量生长素培养基。如烟草、矮牵牛、四季海棠、天竺葵、菊花、倒挂金钟等组织的分化。 ③ 只加细胞分裂素的培养基。如豌豆、油菜、小麦等。 ;生根培养基： 诱导再生小苗生根的培养