LICOROdyssey红外荧光成像.doc

一. Odyssey红外成像系统技术特点 一般的荧光染料的激发和检测波长都位于可见光谱区，在此波长范围内，化学高分子物质（膜、胶、微孔塑料板等）也会发出荧光，因此易产生高背景的荧光干扰，从而不能有效用于膜上蛋白或者核酸的直接荧光成像。而在红外波长区这些大分子物质几乎不发出任何荧光信号，使得红外荧光染料在长波下检测时背景荧光很低，具有很好的信噪比，这一特点使得核酸和蛋白的膜上荧光检测成为可能。LI-COR根据红外荧光的这一特点开发出Odyssey红外成像系统，独特的采用2个红外激光作为激发光源，以扫描成像方式对样品进行检测。样品载体可以是膜、凝胶和微孔板。该系统配置的2个红外激光激发光源，激发光波长分别为680nm和780nm，配置的2个高灵敏度光敏二极管可以分别检测720nm和820nm的发射荧光，因而Odyssey可同时检测两种IRDyes染料的荧光信号。IRDyes染料的最大吸收值与Odyssey的两个红外激光器680nm和780nm激发波长相匹配，其发射光波长又与Odyssey的两个光敏二极管检测波长相匹配，与同时IRDye700和IRDye800的发射波长峰值相隔100nm，因此Odyssey可以给出最大的灵敏度和最小的信号交叉。同时由于采用二极管激光器和固态检测器，Odyssey具有很长的使用寿命（激光器使用寿命约4-6万小时），而系统维护的要求却很低。该系统可广泛应用于信号传导，蛋白磷酸化分析，In-Cell-Western分析等蛋白领域研究。 主要特点 1．高灵敏度,效果同于或者好于化学发光法，但不需信号放大步骤，信噪比高。 2．直接检测，无需曝光和显色底物，不需要X光片，不需要暗房，没有放射性废料产生。 3．双色检测，可以在一次杂交中同时检测两种目的分子，直观，省时。 4．宽广的线性范围，可用于高准确性定量。 5．背景低，图像清晰，激光强度可调，不会丢失弱的信号 6．强有力的软件支持，结果分析如确定分子量和定量及图象处理编辑很容易 7．系统操作和维护简单 Odyssey的应用 应用领域：蛋白质研究，核酸研究 具体包括：Western分析，In-Gel Western分析，蛋白质定量分析，双色磷酸化分析，考马司亮兰胶的扫描，蛋白双向电泳，双色 EMSA，双色微孔板分析，BD PowerBlot Analysis，Northern Blot，Southern Blot等 二．系统安装条件 位置要求：稳定水平的操作平台放置设备，远离热源，避免阳光直射 空间及载重要求： 操作平台尺寸（长×宽×高）：80×70×80cm 操作平台载重：40kg 温度要求：15-25℃ 湿度要求：不超过60% 电源：90-250V AC，47-63Hz。 其它：通用插头接线板（至少3个插孔）` 三．培训所需试剂设备及样品 Western Blot实验所需试剂耗材： 客户自备的蛋白样品(建议为新鲜制备的蛋白，最好用western验证过) 细胞裂解液 SDS胶 电泳缓冲液 PVDF膜(硝酸纤维素膜也可) 转移缓冲液 PBS TBS 封闭液（建议使用5%进口脱脂奶粉） Tween-20 一抗 荧光标记的二抗（IRDye700和IRDye800） 锡箔纸 （通用试剂详细配方请参照《分子克隆实验指南》） 其它配套设备： 蛋白电泳仪 脱色摇床 转膜仪 分子生物学实验室常用工具： 加样器，Tip头，量筒，离心管，离心机，冰盒等。 以上物品请您提前准备妥当，我们将使用以上物品进行仪器使用的培训工作。 四、培训程序及时间安排 （请至少安排2名实验室长期工作人员参加培训，方便以后有人员变动您也能进行仪器内部培训。） 仪器安装及使用培训（2小时） 实验安排布置，用户实际操作培训（不同的实验时间有所不同，以Western Blot为例，时间为1天半）。实验的安排上建议同时做红外荧光检测与化学发光检测的对比实验，方便两种方法结果的对比。 软件基本功能综述及使用培训（1小时） 五、仪器及试剂系统介绍 Odyssey红外成像系统技术特点讲解 仪器系统组成和工作原理讲解 配套试剂介绍 实验操作流程 实验设计：化学发光及荧光检测对比实验 1先将蛋白样品做3个浓度梯度稀释如1：10，1：100，1：1000，加上未稀释的蛋白共4个实验样品，再加上预染marker我们称之为一组样品 2蛋白电泳上样的顺序为预染marker，未稀释样品，1：10，1：100，1：1000，预染marker，未稀释样品，1：10，1：100，1：1000（两组样品中间建议空一个样品孔，方便以后的剪膜） 3转膜完成后，开始进行封闭及一抗孵育的操作步骤 4一抗孵育及洗膜完成之后，将两组样品膜剪开。两张膜分别按照荧光检测及化学发光检测的方式进行二抗的孵育，洗脱及结果的分析。Western