中医药论文黄芪中黄芪总皂苷的大孔树脂纯化工艺研究.doc

中医药论文： 黄芪中黄芪总皂苷的大孔树脂纯化工艺研究 【摘要】 目的优选出分离纯化黄芪中黄芪总皂苷的最佳工艺条件。 方法采用动态吸附解析法,用超高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量,优选出最佳纯化条件。 结果D101树脂对黄芪总皂苷的纯化最优,以2 BV/h吸附速率吸附,5 BV 70%乙醇以3 BV/h的流速进行洗脱效果最佳,黄芪甲苷的精制度为446.28%。 结论D101大孔吸附树脂可用于黄芪总皂苷的纯化。 　　 【关键词】黄芪;黄芪总皂苷;大孔树脂 黄芪为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪 Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根[1],其主要成分为黄芪总皂苷,具有广泛的药理作用,如强心、抗胃溃疡、对外周神经系统的再生具有双重调节作用、降血压等作用[2-5]。本文以黄芪甲苷为指标对黄芪中黄芪总皂苷的纯化进行了研究,为以后黄芪的进一步开发做基础。  　　1 材料与仪器 　　黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110781200613);黄芪药材(浙江中医药大学中药饮片厂),经浙江中医药大学资源鉴定教研室陈孔荣副教授鉴定为膜荚黄芪 Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。化学试剂均为分析纯。D201、D101、DM130(天津南开大学化工厂)。赛多利斯分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司);RE52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂),Waters AcquityTMUltraperformance LC色谱仪、AcquityTMTUV检测器; 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);流动相:乙腈-水(35∶65); 漂移温度:50℃;流速:02 ml/min;柱温:30℃;氮气压力:45PSI。 　　2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量,用甲醇制成浓度为0066 mg/ml的溶液,作为对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 取黄芪粗粉约3 g,精密称定,加甲醇24 ml加热回流2次,每次2 h,过滤合并滤液,减压回收并用甲醇定容至50 ml量瓶中,备用。 　　2.4 标准曲线的制备 取“2.2”项下的对照品溶液,分别进样05、1、1.5、2.0、2.5 μl,以对照品峰面积的常用对数值(Y)为纵坐标、进样量(μg)的常用对数值(X)为横坐标进行线性回归,得回归方程为Y=39921X16698( r =09997)。结果表明,黄芪甲苷进样量在0033~0165 μg范围内的对数值与峰面积对数值呈良好线性关系。 　　2.5 精密度实验 取2.2项下的对照品溶液进样,重复测定6次,每次进样3 μl,记录峰面积,计算得RSD为051%。 　　2.6 稳定性实验 按照“2.3”项下制备样品一份,分别于0 h、4 h、6 h、8 h、10 h进样,每次进样3 μl,依法测定,记录峰面积。计算得RSD为3.14%,表明样品在10 h内稳定。 　　3 上柱药液的制备 　　取黄芪粗粉约80 g,精密称定,加甲醇240 ml加热回流2次,每次2 h,过滤,合并滤液,减压回收甲醇并用纯净水定容至50 ml量瓶中,备用。 　　4 树脂的选择 　　称取预处理过的树脂各5 g于100 ml锥形瓶中,加入一定量供试品溶液,盖紧瓶塞,每隔10 min振摇20 s,持续2 h,静止放置24 h,过滤,测量滤液中黄芪甲苷含量,计算吸附率。将经静态吸附后的树脂水洗至无Molish反应(吸取1 ml清洗液,加5%α萘酚乙醇溶液3滴,摇匀。沿试管壁缓缓加入05 ml浓硫酸,如在试管与硫酸的交界面处,很快形成紫色环),加70%乙醇20 ml解吸,每隔10 min振摇20 s,持续2 h,静置24 h后,过滤得解析液,测定其黄芪甲苷含量,计算解析率。 　　 表1 　　 树脂的筛选 　　树脂型号 吸附率(%) 转移率(%) 　　D201 705 62.9 　　D101 92.8 89.2 　　DM130 88.3 84.8 　　表1表明,D101对柴胡皂苷和姜黄素的吸附率与转移率均最高,所以选用D101大孔树脂。 　　5 动态考察 　　5.1 动态吸附曲线的考察 取DM101树脂20 g(ф18 mm×40 cm)于柱内,精密吸取按上述方法制备的黄芪水溶液上柱,流速为3 BV/h,每20 ml收集为一流分,测量流出液中黄芪甲苷的含量。以流出液体积(ml)为横坐标