中药微生态制剂对雏鸡免疫力的影响2.doc

中药微生态制剂对雏鸡免疫力的影响 摘要：1日龄AA雏鸡随机分为中药微生态制剂“雏乐福”试验组和对照组，用间接酶联免疫吸附试验(IELISA)法分别测定了2组雏鸡泪液、气管液、胆汁和肠液的IgA、IgM、IgG相对含量的动态变化。结果发现，雏鸡服用中药微生态制剂“雏乐福”后1-49 d，上述4种体液的3种免疫球蛋白含量均不同程度地高于未服用“雏乐福”的对照组雏鸡，表明“雏乐福”可在一定程度上增强雏鸡呼吸道和消化道局部的体液免疫功能，提高雏鸡免疫力。 关键词：中药、微生态制剂、发酵、“雏乐福”、益生素、免疫力、雏鸡、局部体液、免疫球蛋白 中药微生态制剂“雏乐福”是摄入后能对机体健康或生理机能产生有益影响的中药微生态发酵制剂，常被用作饲料添加剂，可以提高动物生产性能、饲料转化率，以及增强动物抗病能力。禽大多数传染病是通过局部黏膜途径传播的，而局部黏膜免疫系统是机体抵抗外界环境变化和病原微生物入侵的第一道屏障，广泛分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道及一些外分泌腺的淋巴组织，是执行局部特异性免疫功能的主要场所。本研究对服用中药微生态制剂“雏乐福”的雏鸡局部体液(泪液、气管液、胆汁和肠液)的IgA、IgM、IgG含量进行动态检测，为“雏乐福”在兽医临床应用及进一步市场推广提供理论依据。 1 时间、地点、材料与方法 1. 1 试验时间和地点 试验时间：2012年6月27日--2012年8月19日; 试验地点：在江苏省徐州市某大型肉鸡养殖场。 1．2 试验动物 1日龄AA混合肉雏鸡80只，购自安徽省合肥市某孵化场，鸡传染性法氏囊病、马立克氏病和传染性支气管炎等抗体检测均为阴性。 1．3 中药微生态制剂 中药微生态制剂“雏乐福”：由合肥太阳雨生物工程有限公司生产，批号：饲添字(2007)2316号，按产品说明使用。 1．4 兔抗鸡IgA、IgG、IgM血清 兔抗鸡IgA、IgG、IgM血清由扬州大学农学院禽病免疫病理研究室制备。 1．5 HRP标记羊抗兔IgG结合物 辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔IgG，购自北京中杉金桥生物技术有限公司，批号：83228，ZB一2301。 1．6 试验动物分组及处理 80只雏鸡随机分为“雏乐福”组(P组)和对照组(C组)。其中P组雏鸡分别于1-49日龄连续灌服“雏乐福”稀释液，1次／d；C组雏鸡于上述相同时间灌服等量生理盐水。 1．7 被检材料采集 分别于0、4、7、10、17、24、38、52日龄每组随机抽取5只雏鸡，采集泪液，然后心脏采血处死，采集气管液、胆汁和肠液，低温保存，供免疫球蛋白含量检测用。 1．8 检测指标及方法 用间接ELISA法测定泪液、肠液、气管液和胆汁IgA、IgG、IgM相对含量：①将待检体液用0．05 mol／L PH 9．6的碳酸盐缓冲液适当倍数稀释后，加入96孔聚苯乙烯酶标板中(200μL／孔)，4℃湿盒过夜；②0．01 mol／L PH 7．4磷酸盐缓冲液(含 0.05％Tween一20)洗涤，5 min／次×3，控干；③分别加入适度稀释的兔抗鸡IgA、IgC、IgM血清，每孔200μL，37℃湿盒内作用2 h；④重复步骤②；⑤每孔加入适当稀释的HRP-羊抗兔IgG结合物200μL，37℃湿盒内反应2 h；⑥重复步骤②；⑦每孔加人50μL TMB显色液，室温显色10-15 min；⑧每孔加入50μL 2 mol／L H2S04。终止反应，在DG3022酶联比色检测仪上测定450 nm的光密度(OD)值。每个被检样品设3个重复，同时每个反应板设空白对照及阴性对照。 1．9 数据处理 采用SPSS 16．0软件进行数据处理，比较各组间差异。 2 结果 2．1 雏鸡服用“雏乐福”后泪液和气管液免疫球蛋白相对含量的动态变化 从表1可知，雏鸡服用“雏乐福”后1-49 d，其泪液Iga、lgM和19G含量均不同程度地高于未服用“雏乐福”的对照组雏鸡，其中IgM和IgG于4-7 d较对照雏鸡明显升高(P0．05或P0．01)；IgA含量于7-21 d明显高于对照雏鸡(P0．05)。气管液IgA、lgM、IgG均于7 d和21 d差异显著或极显著增加(P0．05或P0．01)；IgG、IgM含量分别于14d、49 d明显高于相应对照雏鸡(P0．05)。 表1 雏鸡使用“雏乐福”后泪液和气管液免疫球蛋白含量变化 2．2 雏鸡服用“雏乐福”后胆汁和肠液免疫球蛋白相对含量的动态变化 由表2可见，雏鸡服用“雏乐福”后，其胆汁IgA含量于1-7d和21 d极显著高于对照雏鸡(PO．01)；lgM在21 d和35d明显较对照雏鸡升高(P0．05)，IgG在1-7 d、21 d和35d明显高于对照雏鸡(