动物组织细胞学实验.doc

实验一 动物的实验技术和方法 动物实验的方法是各种各样的，如常用模型复制法、切开和分离法、切除和注入法、离体组织器官法等，在不同的研究领域有其不同的目的和应用，但是一些基本的 操作技术方法是一样的，如动物的抓取、固定、标号、脱毛、麻醉、给药、采血、采尿、处死等，对于实验研究者来说无论从事哪一类研究项目，都会不同程度的应用这些技术。下面以大鼠为例，介绍相关的动物实验技术。 动物的抓取和固定方法 抓大鼠时，最好戴上防护手套。如果是灌胃、腹腔注射、肌肉和皮下注射时，可用拇指、食指捏住大鼠的耳朵及头颈皮肤，余下的三指紧捏住背部皮肤，置于掌心中，调整大鼠在手中的姿势后即可操作。另一种方法是张开左手虎口，迅速将拇指、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中段，并将其保持卧位，之后调整左手拇指位置，紧压在下颌骨上（不可过紧，否则会造成窒息），即可进行实验操作。 若对大鼠进行采血和手术操作，需对大鼠进行麻醉后，将四肢用棉线固定在实验板上，为防止苏醒时伤人或便于颈、胸部实验操作，应用棉线将大鼠两上门齿固定于实验板上。 二、动物的编号、标记、分组和被毛方法 1、和标记方法 在动物实验中，为了观察每个实验动物的反映情况，必须对实验动物进行编号、标记。标记的方法应该保证号码清楚、耐久、简便、易认和使用。比如：染色法、挂牌法、烙印法、耳孔法。一般来说，小型动物适宜用耳孔法和染色法，中型动物适用挂牌法和烙印法。 大鼠常常选用染色法，即用化学剂在动物身体明显的部位如被毛、四肢等处进行涂染或用不同颜色等来区别各组动物，是最常用、最容易掌握的方法。这种方法多用于实验周期较短，动物数量不多的情况。动物无疼痛和损伤，但由于动物之间相互摩擦、舔毛、尿、水浸渍被毛或脱毛，或因日久颜色自行消退，应及时发现，及时补染。常用编号标记溶液有：①3%-5%苦味酸溶液，涂然橙黄色；②2%硝酸银溶液，涂染成咖啡色（涂后需光照10min）；③0.5%中性红或品红溶液，涂染成红色；④煤焦油酒精溶液，涂染成黑色；⑤龙胆紫溶液，涂染成紫??。 标记时，用标记笔蘸取上述溶液，在动物体表不同的部位涂上斑点，以示不同号码。编号的原则是：先左后右，从前到后。一般把涂在左前脚上的记为1号，左侧腹部为2号，左后腿为3号，头顶部为4号，腰背部为5号，尾基部为6号，右前腿为7号，右侧腰部为8号，右后腿为9号。若动物编号超过10或更大数字时，可使用上述两种不同颜色的溶液，即把一种颜色作为个位数，另一种颜色作为十位数，这种交互使用可编到99号。 2、动物的随机分组 ①将实验单位随机分成两组 设小鼠14只用随机数字表将其分成两组。 动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 随机数目16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23 归 组 B B A B A A B A B B A A A A 单—A组 双—B组 A组8只，B组6只，将A组减少1只划归B组，在第14个随机数后再抄录一个数字78，以8除之余数6，把第6个A（即编号为12号的小鼠）划给B组. 即： A组: 3 5 6 8 11 13 14 B组: 1 2 4 12 7 9 10 ②将实验单位随机分成三组 设有动物15只，随机分成A，B，C三组。 动 物 号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 随 机 数： 18 62 40 19 12 40 83 95 34 19 44 91 69 03 30 除3后余： 3 2 1 1 3 1 2 2 1 1 2 1 3 3 3 归 组： C B A A C A B B A A B A C C C 使三组动物数相等，把原归A组的6只动物中1只改配到B组，可从随机数字表，斜角线，抄录一个数字，得60。以6除。除尽（相等于余数为6），就可以把第六个A（即12号）动物改为B组。即： A组： 3 4 6 9 10 B组： 2 7 8 11 12 C组： 1 5 13 14 15 3、动物被毛的去除方法 动物的被毛常能影响实验操作和实验结果的观察，因此实验