卫生管理-SOP-009层流净化区室沉降菌检测操作规程.doc

浙江大学医学院附属第二医院 文件编号制定单位名 称页数/总页数 PAGE 7 /  NUMPAGES 7卫生管理-SOP-009生物治疗研究中心层流净化洁净区沉降菌检测操作规程版本2014-04-A 目的：本文件规定了洁净层流净化室区沉降菌检测的标准操作规程。以规范洁净层流净化室区沉降菌监测的标准操作，使其监测规范化，避免人为错误。 范围：本规程适用于洁净层流净化区，包括生物安全柜及传递窗，沉降菌的监测。 权责： 中心负责人：负责本文件的起草,培训并落实本卫生管理规程。 中心工作人员：负责对本操作规程的实施。 定义： 静态测试：洁净层流净化区净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净层流净化区内没有生产人员的情况下进行的测试。 动态测试：洁净层流净化室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。 单向流：1级~100级的洁净层流净化室，均采用单向流的气流组织送风方式。洁净层流净化空气经过净化天花中高效过滤器和静压箱的均压均流作用后，从送风口垂直送入。自天花送风口至室内两侧回风口，气流流经途中的同一截面的任意一点，气流的方向和速度均保持一致，气流流线单向平行，没有涡流。洁净空气似空气活塞般将室内的尘埃粒子以最快的速度型回风口排走，是洁净室在运行状态下始终保持洁净状态。 非单向流：1000级~10万级洁净室的气流组织方向和100级以上的洁净室不同，洁净气流从天花送风口垂直送入，迅速向四周扩散、混合，同时将等量的气流从回风口排走。与单向流不同的是，室内的气流是以不均匀的速度呈不平行流动，伴有回流或涡流，它主要靠洁净的气流不断稀释室内的空气，将室内的污染逐渐排除，来实现净化。 作业内容： 沉降菌监测总则 沉降菌监测采样为平板暴露法进行空气采样。 空气培养实施的频次：每次清洁后，每月的空气培养由医院感染管理本研究中心制空气培养需要的普通琼脂培养平板，频率为每两周一次常规清洁，若实验完成后，安排过清洁，常规清洁时间为上次清洁后，顺延两周；每季度实施一次院感监控，直接从本院临床微生物中心领取平板，采样后，由临床微生物中心负责培养、鉴定和结果报告。 仪器与设备监测试剂 空气培养需要的普通琼脂培养平板高压消毒锅、恒温培养箱、培养皿（φ 90 mm×15 mm）、营养琼脂培养基。 测试步骤 培养基平皿的制备及使用 LB Broth Agar 培养基配制 1L溶液中：Tryptone(胰蛋白胨)，10g；Yeast Extract(酵母提取物)，5g；NaCl(氯化钠)，10g；Agar(琼脂)，15g。pH值7.0?±?0.2，?25℃?。 或者，按照厂商配制好的营养琼脂，可以加水后直接制作培养基，直接灭菌后倒平板使用。 将三角瓶装好的培养基在高压锅内121℃下湿热灭菌20min，并让其在锅内自然冷却。 将制得的培养基加热熔化，在45℃左右以无菌操作下将培养基到倒入无菌培养皿，每皿约15mL。 待培养基凝固以后，随机取其中一块培养基平皿倒置于37℃恒温培养箱中培养48h，确定无菌生长时方可供检测用。 制备好的培养基平皿应在2℃～8℃的环境中保存。记录好平板的配制时间及有效期，原则上配置好的平板建议在1个月内使用。 将已制备好的培养皿按采样点要求的布置点放置。打开培养皿盖，使培养基在空气中暴露30分钟，再将培养皿盖盖上后并倒置。 静态测试时，培养皿暴露时间为30 min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4 h。 全部采样结束以后，将培养皿倒置送临床微生物中心负责培养、鉴定和结果报告在37℃的恒温培养箱中培养48h。 送出平板48h后通过院感中心软件查询结果用肉眼直接观察计数，然后用5～10倍放大镜检测有否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，但可分辨时应按实计数。 测试规则 测试状态 沉降菌测试前，洁净区或洁净室的温湿度必须达到规定的要求；换气次数、空气流数必须控制在规定值内。 测试前层流净化洁净室应全面消毒。 测试状态为静态测试，并在报告中注明。 测试人员 洁净层流净化室（区）的检测人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100,000级以上的区域。 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。 测试时间 对单向流，如100级净化工作台，测试应在风机正常运行不少于10 min后开始。 对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30 min后开始。 采样点数量及其布置 最少采样点数目 沉降菌测试的最少采样点数参照GB/T 16292-2010。 表1 最少采样点数目 面积 M2洁净度级别10010,000100,000300,000＜102~3222≥10~＜204222≥20~＜408222