基因工程第三章克隆载体—2.ppt

第二节 病毒载体 virus vector;噬菌体的溶原性周期和溶菌性周期 ;1. λ噬菌体克隆载体;（1）λDNA： 线状，双链DNA， 48502bp （linear，double-stranded DNA，dsDNA） cos位点：λDNA两端各有12bp的粘性末端，两者互补，进入宿主后可连成环状DNA。;宿主细胞;6/31;（2）λDNA 有56个限制酶识别序列，50个基因， 左臂，右臂和中央片段，中央片段可以被替代。;(3)、 λ 噬菌体的侵染;1.2、λ噬菌体载体的构建;（2）插入标记基因（marker gene） 例如：lacZ 基因，转化的菌斑在含有X-gal的培养基因上表现篮色.;;部分消化;;重组的噬菌体;2、 柯斯质粒载体（Cosmid vector）;体外包装;第三节、染色体定位整合载体;一、定位整合模式;与受体细胞和同源序列长短有关，一般较低 (10-7-10-3 ). 会出现随机插入，筛选困难。;1 定义 酵母人工染色体：具有酵母染色体的着丝粒（cen4）、自主复制序列(ARS1)和端粒等功能序列的质???载体。 可容纳1000至3000kb的DNA大片段。;;着丝粒;;2 应用 2.1 构建基因组文库（ genome library）： 特别适于动植物等基因组较大的生物。 2.2、基因治疗(Gene therapy)： 可复制，安全 ;一、启动子探针型载体 质粒载体，含有一个检测部件（一个无转录功能的标记基因和克隆位点）;The gene which can not express;二、诱导型表达载体： 启动子在特殊的诱导条件下才有转录活性。 外源基因处于这样的启动子下，必须有诱导条件才能表达。 优点：易于人的控制，安全，可用于基因治疗。;三、组织特异性表达载体 只能在特定组织中表达的载体。 乳腺组织特异性表达载体：利用牛、羊等动物的乳腺产生药物。 肿瘤细胞特异性表达载体：基因治疗药物的定向导入。 ;四、分泌型表达载体 基因表达的蛋白可分泌到胞外，利于产物分离纯化。;;