自含式生物指示剂孢子数方法确认.pdfVIP

上海汉尼生物技术有限公司 MA/6 含菌量测试方法说明 第一步：任意选择同批里的四支做计数用。 第二步：将 MagnaAmp 放入 250 mL 的无菌玻璃瓶里。 第三步：用无菌的不锈钢棒将 MagnaAmp 捣碎。 注意：确保安瓿要足够碎，安瓿的上面较窄的部分和下面较宽的部分都要被捣碎。 1 上海汉尼生物技术有限公司 第四步：往装 MagnaAmp 的瓶子里加入 95.2 mL 无菌水，顺便冲洗刚才使用的不锈钢棒。 注意：确保加入正确体积的无菌水，并冲洗用于捣碎的工具。 （MA 每一支安瓿的孢子悬液体积 1.2ml、4 支安瓿瓶总体积为 4.8ml、加入 95.2ml 的水使得 总体积达到 100ml） 第五步：振荡玻璃瓶至少 1 分钟，使液体混合均匀。 注意：Mesa Labs 使用的涡旋振荡仪是 Vortex Genie 2，60Hz 2 上海汉尼生物技术有限公司 第六步：在超声破碎前将溶液放置 5 分钟使气泡散出来。然后在 46-60 kHz 下超声 5 分钟。 刚振动之后 放置 5 分钟后 注意：Mesa 使用的超声处理器是 Cole-Parmer ultrasonic cleaner, 型号 08849-00，55 KHz。 如果您的超声清洗机的输出功率较低，超声时间可以增加，如果输出功率较高，超声时间可 以适当降低。 超声是非常重要的，它能将粘附于玻璃上的孢子洗下来，样品中的气泡会降低超声的效果。 在超声时，玻璃瓶不要接触超声洗浴的底部和四边，否则会降低超声的效力。 可以通过试验确定超声时间，因为太多声波能量会最终损坏孢子。 第七步：振荡溶液约 10 秒，振荡后立即吸取 10 mL 溶液至一 19.5 x 145 mm 平底试管中准 备热击。 第八步：在已预热至所需温度的水浴中热击包含了 10 毫升溶液的管子至合适时间。将管子 取出置于冰浴（ 0 ℃到 4 ℃ ）中 5 分钟。 注意：确保水浴是在正确的温度范围里，热击管放到水浴中立即开始计时。热击时间一到立 即将热击管放入冰浴中立即冷却。 热击的目的：1：杀死可能残留在产品中的营养细胞，以便测定到具有抗性的芽孢的数量.。 2 激活处于休眠状态的芽孢，以便它们能够在 TSA 上生长。 冷却的目的：避免的额外的热量损害芽孢。如果没有冷却，孢子热暴露（接近热击温度）的 时间，嗜热脂肪芽孢杆菌是喜热的，可能不会受到影响；但是枯草芽孢杆菌会受到影响。 孢子种类 热击温度 热击时间 嗜热脂肪芽孢杆菌孢子 MA 95-100 ℃ 15分钟 3 上海汉尼生物技术有限公司 第九步：热击试管做梯度稀释。 注意：在漩涡振荡后立刻转移每一稀释液非常重要。转移前漩涡震荡热击试管至少 10 秒钟， 以避免悬浮液产生沉淀。 以含菌量数量级为 106 为例。 使用一支 1ml 的吸液管，转移 1ml 到含