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苯基-琼脂糖凝胶 6FF使用说明
苯基-琼脂糖凝胶 6FF 使用说明
货号: S8831
规格:25mL
保存:产品应密封贮存在 4℃~30℃(保存溶液为 20% 乙醇+0.1M 醋酸钠),通风、干燥、清
洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在 4℃(20% 乙醇)。保质期 5 年。
产品说明:
苯基-琼脂糖凝胶 6FF 是将苯基键合在 6FF 琼脂糖微球上形成的一种可利用疏水相互作用来
实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。本品为白色
球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
理化指标
项 目 指 标
配基 R-OCH2-CH(OH)-CH2-O-C6H5
基质 6% 交联琼脂糖
形状 球形
粒径 45~165 μm
蛋白质吸附容量(HSA) 36mg/ml(高);24mg/ml(低)
最高流速(25℃) 100KPa 下 200 cm/h*
耐压 0.2 MPa
工作温度 4~40℃
pH 适用范围 2~14(短时间 ,在位清洗);3~13(长时间)
以下溶液中稳定:
化学稳定性 1mol/L NaOH;70% EtOH;30%异丙醇;0.5%SDS;
6mol/L 盐酸胍;8mol/L 尿素;3 mol/L(NH4)2SO4
*柱子:柱子:内径 16mm、柱长 10cm,柱床高 5cm,25℃,流动相为 0.1mol/LNaCl。
使用说明:
1. 装柱
(1)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
(2)根据柱子大小取所需量的凝胶,清洗掉 20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓
冲液=3:1 的比例)配成匀浆。
(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底
端无气泡。
(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,
使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过,使柱床稳定。用 2~3 柱体
积的缓冲液平衡柱子。
2. 平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和 pH 不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度
的缓冲液,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS 加 1~2.5mol/L(NH4)2SO4 等。
3. 上样
(1)样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。
(2)一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目
标产品。
(3)介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓
度大、温度高或样品组分疏水性强,介质对组分吸附牢。
4. 洗脱
疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液
是低盐浓度缓冲液,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS。
5. 再生
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