第10节产气荚膜梭状芽孢杆菌检验.pptVIP

第十节 产气荚膜梭菌检验;目录 1、概述 2、生物学特性 （菌体形态学特征、 培养特性和抵抗力） 3、毒素与分型 4、培养基和试剂 5、检验程序 6、说明 ;1、概述 产气荚膜梭状芽孢杆菌 又称魏/卫氏梭菌 分布：自然界广泛存在(创伤感染）。 易污染食品：动物性食品原料 食品加热后未及时冷却，所含耐高温而残余的产气荚膜梭菌芽孢会迅速发芽，大量繁殖，菌数可达数10万/g，食用前又未加热，则有可能引起产气荚膜梭菌食物中毒。 食品中产气荚膜梭菌检验的主要目标是检验食品被该菌污染的程度，其重点项目是活菌数测定及证实试验。;2、生物学特性 1)形态与染色 G+(陈旧培养物阴性菌）无鞭毛可形成荚膜和芽胞的大杆菌 大小：为(1－2)μm X(2－10)μm 。 芽孢：卵圆形位于菌体中央或近端，直径大于菌体的 直径，有的菌株难形成芽胞。 荚膜：在人和动物活体组织内，或在含血清的培养基 内生长时可形成荚膜。 ;/shouyiweishengwu/图片资料/产气荚膜梭菌.jpg;2)培养特性;肝片肉汤培养： －－大量产气，培养5h-6h变浑浊； 牛奶培养基中生长： －－能够分解乳糖产酸，将酪蛋白凝固 产生大量气体，冲散酪蛋白， 使其成海绵状。 庖肉培养基中培养： －－产生大量气体，肉渣或肉块 略带粉红，但不消化。 普通琼脂平板上培养： －－15h－ 24h形成S型菌落， 在营养不足或琼脂浓度 高的平板上可形成锯齿状带 放射条纹的R型菌落。 ;鲜血琼脂平板生长： －－菌落周围出现双层溶血环，内层溶血完全，外 层溶血不完全，好似靶状，菌落本身略带灰黄 色至浅灰褐色，与空气接触30min后，有时可能 逐渐变为灰绿色、甚至鲜绿色，这是本菌的特 征之一。 ;Clostridium perfringens Growing on Blood Agar ; 菌落周围出现乳光浑浊带，此反应能被本菌的 α抗毒素抑制。 *由于发酵乳糖，菌落周围的培养基颜色发生变化 *本菌不消化牛奶，不分解游离脂肪，菌落周围不出现透明环及虹彩层（肉毒梭菌可形成）。;3) 生化特性 *发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖及蔗糖，产酸产气， *液化明胶 *还原硝酸盐为亚硝酸盐。 *能将亚硫酸盐还原为硫化物， 在含亚硫酸盐及铁盐 的琼脂中形成黑色菌落 ; *发酵牛奶中的乳糖，使牛奶凝固，同时大量产气，凝块碎裂，即所谓‘‘暴风雨式发酵”，这是本菌的重要生化特征之一，也是鉴别的主要指标。; 4）抵抗力 A型与C型菌株的芽胞：耐热性强，煮沸1－3h， 繁殖型菌体不耐热。 ;3、毒素、酶与分型 毒素：产气荚膜梭菌能产生外毒素和肠毒素。 外毒素：致死毒素、坏死毒素和溶血毒素， 毒性不强不耐热。 肠毒素：不耐热，60℃经10min即可破坏不 耐酸，对碱有抵抗性，对胰蛋白酶 等蛋白分解酶比较稳定。 酶 ：纤维蛋白酶、透明质酸酶、胶原酶等 这些毒素和酶促使组织分解、坏死、产气、水肿及病变扩散和全身中毒等。;分型： 根据毒素和抗血清中和试验将此菌分成A，B，C ，D，E 和F六个型。 A型：最常见，引起气性坏疽和食物中 毒； A型最早由Welch andNuttal(1892)分离， 所以叫卫氏/魏氏梭菌 C型：可引起肠炎。 *对人致病的主要是A、C和F型 *引起食物中毒的主要是A型 ;4、培养基和试剂 4.1 庖肉培养基 －－产生大量气体，肉渣或肉块略带粉红，但不消化 4.2 亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂（SPS） -- 能将亚硫酸盐还原为硫化物，在含亚硫酸盐及 铁盐(含有柠檬酸铁胺)的琼脂中形成黑色菌落；前面 分离培养和计数用 ;4.3 液体硫乙醇酸盐培养基（FT） －－大量培养该菌用 ; 4.5 含铁牛奶培养基 --发酵牛奶中的乳糖，使牛奶凝固，同时大量产气，凝块碎 裂， 即所谓‘‘暴风雨式发酵”/“暴烈发酵”，这是本菌的 重要生化特征之一，也是鉴别的主要指标。观察2h， 5h不发酵为阴性;4.6 卵