熔解曲线分析检测临床常见4种革兰阳性菌的方法建立.pdfVIP

中国抗生素杂志??年?碌??淼?期 449 文章编号：??—???? ??—??—? ????????????????????????4?????????????????????? 陈弟 邵剑春刘德华周玲泰海燕 ??????+ n????????????????????????????????????????650011??2??????????????????????????????650011) 摘要：目的 ??????????????????????????4??????????????????????????????????????????????????????????????????? 子生物学检测信息。方法 选取临床最常见的革兰阳性病原菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌做为本 课题研究的检测菌种。根据检测菌种的不同，分别选取不同菌种的特异性靶序列，设计种特异性引物。对种特异性引物分别用 标准菌株、临床分离目标菌株、临床分离非目标菌株、非细菌性病原体以及人源基因组???谐９鍼?扩增以及扩增产物测 ????????????????????????????????????????????PCR????????????Tm?????????????????????????????????????????????? 并对熔解曲线法的反应条件与反应体系进行优化。对优化后的熔解曲线法进行特异性验证。通过检测加入人血液中的不同细菌 浓度对该方法进行敏感性分析。应用所构建的方法分别检测临床分离目标菌种各?株，分析每种菌种的熔解曲线图，熔点温度 ???及其标准差??的变化，评价所构建方法的稳定性。结果 ??????????????????????????????PCR?????????????????? ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????DNA???????????????????????????? ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????4?? ??????????????????????????mecA??????????????????????????????????????????94*C??120s??????????94????20s???????? ??53????12s??????????684C??13s??????????????40????????????????????????75C??95????????????????????300nmol??L???? 所建立的方法经特异性分析显示，上述?帜勘昃?志?刑匾煨匀劢馇?撸琓?狄来挝?????????????????甀??， ????(cm)??????(cml??????2??6????????????????????????????????????????????????????????????????????????DNA???????? 典型的熔解曲线。④方法的敏感性分析显示，上述?帜勘昃?蚼???蚩杉觳獾降难R合妇?ǘ纫来挝#??、????、 500??203CFU??mL??????????4????MRSA??????????????20????????????????????????????Tm????????(80??96??0??688)??C?? (80??20-??-0??729)C??(82??42??-0??599)*C??(83??20i-0??