第6章工业微生物产生菌的分离筛选.pptVIP

第六章 工业微生物产生菌的分离筛选;菌种;菌种收集和筛选途径;第一节 含微生物样品的采集;2.土壤酸碱度和植被状况 偏碱土壤环境，适合于细菌、放线菌生长。偏酸的土壤环境下，霉菌、酵母菌生长旺盛。 植物根部的分泌物有所不同，即植被对微生物分布也有一定的影响。如番茄地或腐烂番茄堆积处有较多维生素C产生菌。葡萄或其他果树在果实成熟时，其根部附近土壤中酵母菌数量增多。豆科植物的植被下，根瘤菌数量比其他植被下占优势。;3.地理条件 南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多，特别是热带和亚热带地区的土壤。许多工业微生物菌种，如抗生素产生菌，尤其是霉菌、酵母菌，大多从南方土壤中筛选出来。——南方温度高，温暖季节长，雨水多，相对湿度高，植物种类多，植被覆盖面大，土壤有机质丰富，造成得天独厚的微生物生长环境。;4.季节条件 不同季节微生物数量有明显的变化，冬季温度低，气候干燥，微生物生长缓慢，数量最少。到了春天随着气温的升高，微生物生长旺盛，数量逐渐增加。 南方，春季往往雨水多，土壤含水量高，通气不良，即使有微生物所需的温度、湿度，也不利于其生长繁殖。随后经过夏季到秋季，约有7—10个月处在较高的温度和丰富的植被下，土壤中微生物数量比任何时候都多，因此，秋季采土样最为理想。;（二）采样方法 用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5—25cm处的土样10—25g，装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥，可在10—30cm处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。 一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。如果样品较多，或到外地取样，路途遥远，难以做到及时分离，则可事先用选择性培养基做好试管斜面，随身带走。将取好的土样混匀，取3—4g撒到试管斜面上，可避免菌株不能及时分离而死亡。;二、根据微生物生理特点采样;2.根据微生物的生理特性 在筛选一些具有特殊性质的微生物时，需根据该微生物独特的生理特性到相应的地点采样。如： 筛选高温酶产生菌时，通常到温度较高的南方，或温泉、???上爆发处及北方的堆肥中采样； 海洋底部采样——分离耐压菌； 甜果、蜜饯或甘蔗渣堆积处采样——分离耐高渗透压酵母菌。 ;2.极端环境条件的影响 高温、低温、高酸、高碱、高盐或高辐射强度的环境下，也有少数微生物存在，这类微生物被称为极端微生物。生活所处的特殊环境，导致它们具有不同于一般微生物的遗传特性、特殊结构和生理机能，因而在冶金、采矿及生产特殊酶制剂方面有着巨大的应用价值。;第二节 含微生物样品的富集培养;一、控制培养基的营养成分 微生物的代谢类型十分丰富，其分布状态随环境条件的不同而异。 在富集培养时，还需根据微生物的不同种类选用相应的富集培养基。 根据微生物对环境因子的耐受范围具有可塑性的特点，可通过连续富集培养的方法分离降解高浓度污染物的环保菌。;二、控制培养条件 在筛选某些微生物时，除通过培养基营养成分的选择外，还可通过它们对pH、温度及通气量等其他一些条件的特殊要求加以控制培养，达到有效的分离目的。 如细菌、放线菌的生长繁殖一般要求偏碱，霉菌和酵母菌要求偏酸。分离放线菌时，可将样品液在40℃恒温预处理20min，有利于孢子的萌发，可以较大地增加放线菌数目，达到富集的目的。;三、抑制不需要的菌类 在分离筛选的过程中，除了通过控制营养和培养条件，增加富集微生物的数量以利于分离外，还可通过高温、高压、加入抗生素等方法减少非目的微生物的数量，使目的微生物的比例增加，同样能够达到富集的目的。 如土壤中分离芽孢杆菌，可先将土样加热到80℃或在50%乙醇溶液中浸泡1h 筛选霉菌时，可在培养集中加入四环素等抗生素抑制细菌 分离放线菌时，在样品悬浮液中加入10滴10%的酚或加青霉素、链霉素，以及丙酸钠抑制霉菌和细菌的生长。;第三节 微生物的分离;2.变色圈法 对于一些不易产生透明圈产物的产生菌，可在底物平板中加入指示剂或显色剂，使所需微生物能被快速鉴别出来。如： 筛选果胶酶产生菌时，用含0.2%果胶为唯一碳源的培养基平板，对含微生物样品进行分离，待菌落长成后，加入0.2%刚果红溶液染色4h，具有分解果胶能力的菌落周围便会出现绛红色水解圈。 分离谷氨酸产生菌时，可在培养基中加入溴百里酚蓝，它是一种酸碱指示剂，变色范围在pH6.2—7.6，当pH在6.2以下时为黄色，pH7.6以上为蓝色。 通过平板上产生的变色圈还可快速分离筛选产乙醇的菌株。在以糖为碳源的琼脂平板的菌落上，覆盖一层含有盐类物质的琼脂