第7章化学检测.pptVIP

第七章 化学检测技术;化学检测技术特点： 根据物质的化学性质而对物质进行定量、定性测定。 应用最早、最广泛的检测技术 简便、快速、操作容易;一.前言;第一节 糖类的化学检测 ;第一节 糖类的化学检测 ;第一节 糖类的化学检测 ;主要的糖类化学检测技术： 1. 兰－爱农法 2. 斐林试剂快速法 3. 次碘酸钠法 4. 铜试剂法 5. 苯酚硫酸法 6. 蒽酮硫酸法 7. 3，5－二硝基水杨酸法（DNS法）;1.兰－爱农法;1.1原理 糖液滴到斐林试剂中时，还原糖中的游离羰基与酒石酸钾钠铜反应，使二价铜离子还原生成一价的氧化亚铜沉淀。 由于次甲基蓝氧化能力比二价铜弱，当二价铜离子全部被还原后，过量一滴还原糖立即使次甲基蓝还原，溶液的蓝色消失，从而显示反应终点。;第一节 糖类的化学检测 ;第一节 糖类的化学检测 ;第一节 糖类的化学检测 ;第一节 糖类的化学检测 ;第一节 糖类的化学检测 ;2.2实验操作 2.2.1斐林试剂的标定 吸取斐林甲、乙液各5ml，置于250ml三角瓶内，加10ml水，从滴定管中预先加入约20ml0.1％标准葡萄糖液，摇匀后于电炉上加热至沸，立即用标准葡萄糖液继续滴定至蓝色消失。记录消耗葡萄糖液的总毫升数V0。; 2.2.2 样品含糖量测定 吸取斐林甲、乙液各5ml，置于250ml三角瓶内，加入样品稀释液10ml，及适量的0.1％标准葡萄糖液。摇匀后按标定时相同操作进行。记录消耗标准葡萄糖液的毫升数（V)。;2.2.3 计算 还原糖含量（％）＝（V0-V)*c*N/10 式中，V0——斐林试剂标定值，ml V——样品糖液测定值，ml c——标准葡萄糖液浓度，g/ml 10——样品液体积，ml N——样品稀释倍数 ;3.碘量法;第一节 糖类的化学检测 ;第一节 糖类的化学检测 ;4.铜试剂法;4.2 实验操作 4.2.1 铜试剂配制 4.2.2 标准曲线制作： 4.2.2.1 配制葡萄糖标准液 4.2.2.2 取6个三角瓶，分别加入0、1、2、3、4、5ml标准葡萄糖液和5、4、3、2、1、0ml蒸馏水。 4.2.2.3 各瓶加入5ml铜试剂。置于沸水浴中加热10min，冷却至室温。 ; 4.2.2.4 加入0.5mol/L硫酸5ml，振荡。待红色氧化亚铜沉淀完全溶解后，立即用0.005mol/L硫代硫酸钠滴定至浅黄色，加数滴淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失。记录所用硫代硫酸钠毫升数。 4.2.2.5 以葡萄糖含量为纵坐标，以空白滴定值减去标准样品滴定值得出的硫代硫酸钠毫升数为横坐标，绘标准曲线。 4.2.3 样品的含糖量测定 将还原糖样品液适当稀释，取5ml样品液代替标准葡萄糖液，按上述方法进行测定。 测样品中总糖含量，则样品经过水解后，按还原糖含量测定方法进行测定。 测淀粉或半纤维素含量时，水解后测定的还原糖量要乘上系数0.9。 ;5.比色法测糖;5.1苯酚-硫酸法原理 苯酚硫酸法主要用于多糖检测。其原理是：多糖在浓硫酸作用下水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,随后与苯酚结合生成有色化合物,从而可以利用分光光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品中的多糖含量。 5.2 蒽酮-硫酸法原理 非还原性糖在浓硫酸催化下，迅速水解为还原糖。还原糖与浓硫酸作用形成5-羟甲基糠醛，5-羟甲基糠醛，与蒽酮反应生成蓝绿色物质，在625nm处有最大吸收值。 ;5.3 DNS法原理 3,5- 二硝基水杨酸在中性或偏碱性条件下与多糖水解的还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物—3-氨基- 5- 硝基水杨酸, 在一定范围内, 还原糖的量和反应液的颜色呈正比。 ;5.4 DNS法测发酵残糖 5.4.1 标准曲线的绘制 预先配制好1mg/ml葡萄糖标准液。取6支具塞比色管，编号，分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8及1ml的葡萄糖标准液，再补充蒸馏水至2ml，分别添加DNS试剂3ml。将各管溶液混合均匀，在预先加热好的沸水中加热5min，取出立即用自来水冷却至室温，再向每管补充蒸馏水至25ml，小心摇匀。 在分光光度计上，测520nm波长处溶液的OD值。以葡萄糖mg数为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线 。;5.4.2 发酵残糖的测定 准确