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胃黏膜标本中幽门螺杆菌克拉霉素常见耐药位点PCR直接检测分析.pdf
中华微生物学和免疫学杂志 ２０１４ 年 ６ 月第 ３４ 卷第 ６ 期 ， ２０１４， ．３４， ．６ ·４３５·
Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｊｕｎｅ Ｖｏｌ Ｎｏ
· 细菌学 ·
胃黏膜标本中幽门螺杆菌克拉霉素常见耐药位点
直接检测分析
ＰＣＲ
何利华 刘杰 黄蕾蕾 张建中
幽门螺杆菌（Helicobacter pylori， ） 是定植于 ４３５０４。
ＨＰ
人类胃部的螺杆状革兰氏阴性菌，人群感染率超过 胃黏膜基因组的提取：将另一半胃黏膜标本研
５０％。 感染与胃炎、消化性溃疡及胃黏膜相关淋 磨 液 进 行 离 心， 弃 上 清， 并 按 照
ＨＰ ＱＩＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ
巴组织淋巴瘤等疾病密切相关。 克拉霉素是根除 （５１３０６）说明书进行基因组 的提取。
ＤＮＡ
应用最广泛的抗生素之一，耐药率的不断增高严 HP 23S rRNA PCR 检 测及 产 物 测 序： 根 据
ＨＰ
重影响着含克拉霉素 根除 治 疗 方 案的 成 功 ２３ 序列（ ２７２７０， １８２３-２２６６）设
［１］ ＨＰ ＨＰ Ｓ ｒＲＮＡ ＧｅｎＢａｎｋ Ｕ
率 。 现 已 证 实， ２３ 区 的 点 突 变 计上 游 引 物 ２３ - ５′- -
Ｓ ｒＲＮＡ Ｖ ＨＰ Ｓ ｒＲＮＡ ＦＷ ＡＧＣＧＡＴＧＴＧ
（ ２１４２ ／， ２１４３ ）是引起 产生克拉霉素耐 -３′和下游引物 ２３ - ５′-
Ａ Ｇ Ｃ Ａ［２］ Ｇ ＨＰ ＧＴＣＴＣＡＧＣＡ ＨＰ Ｓ ｒＲＮＡ ＲＷ
药的主要因素 。 本研究通过 ２３ 区 -３′，扩增长度为４４４ 。
Ｓ ｒＲＮＡ Ｖ ＰＣＲ ＣＡＡＧＧＧＴＧＧＴＡＴＣＴＣＡＡＧＧ ｂｐ
产物测序方法直接检测胃黏膜组织中 相关基因 反应体系为 ２５ μ，包含 ２．５ μ １０× （含
ＨＰ ＰＣＲ２＋ ｌ ｌ ｂｕｆｆｅｒ
特征从而快速获得克拉霉素耐药情况，并分析与相 ）， ２．５ μ ， 上 下 游 引 物 各 １ μ （ １０
Ｍｇ ｌ ｄＮＴＰｓ ｌ
关菌株耐药表型测定（ - 药敏方法） 结果的一 μ ／μ），０．
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