2008适配子.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１）：１１３～１１８ 适配子筛选技术 张慧卿　方　念　张和 （南昌大学第一附属医院 江西省消化疾病研究重点实验室　南昌　３３０００６） 摘要　适配子的筛选技术近年来不断改良与发展。结合核酸与游离核酸的分离技术的改良，使 适配子筛选效率得到提高；无引物结合部位适配子的筛选技术的建立和短寡核苷酸文库的应用， 使适配子的应用范围更加广泛；适配子筛选技术在功能上的拓展，满足了更多的研究要求。一系 列新方法的建立和应用，使适配子在基础研究和临床应用方面更具潜在价值。 关键词　适配子　ＳＥＬＥＸ技术 中图分类号　Ｑ８１９ 　　??配子（ａｐｔａｍｅｒ）即能与靶分子高特异性、高亲和 （ｓｓＤＮＡ）文库，寡核苷酸链中间为长度 ３０～６０ｎｔ的随 力结 合 的 寡 核 苷 酸 配 基，系 通 过 ＳＥＬＥＸ（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ 机序列，两端为 ２０～４０ｎｔ的固定序列，可根据需要在 ５′ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇａｎｄｓｂｙｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）技术从人 端加上 Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列。同时设计一对相 工合成的大容量单链随机寡核苷酸文库中筛选并富集 应的 ＰＣＲ引物，上游引物序列与寡核苷酸的 ５′端固定 而得。文库中 的 寡 核 苷 酸 单 链 存 在 随 机 序 列，通 过 序列相同，下游引物与 ３′端固定序列互补。将合成的 ＷａｔｓｏｎＣｒｉｃｋ碱基配对原则和分子内交互作用，每一条 原始文库与靶分子孵育，过滤分离出靶分子核酸复合 核苷酸单链均可有不同的三维结构，如发夹（ｈａｉｒｐｉｎ）、 物，洗脱下核酸并进行 ＰＣＲ扩增得到 ｄｓＤＮＡ文库，再 假结（ｐｓｅｕｄｏｋｎｏｔ）、凸环（ｂｕｌｇｅ）、Ｇ四聚体（Ｇｔｅｔｒａｍｅｒ） 进行链分离或不称 ＰＣＲ扩增得到 ｓｓＤＮＡ亚文库，或进 １５ 等。由于筛选文库的容量巨大（可达 １０ 左右），因此 行转录得到 ＲＮＡ亚文库。将亚文库再与靶分子孵育、 理论上应用 ＳＥＬＥＸ技术能筛选到自然界几乎所有靶分 分离、洗脱核酸并 ＰＣＲ扩增，得到新的亚文库，再进行 子的适配子。适配子的作用有如抗体，但它在敏感性、 第二轮筛选。重复进行上述筛选 ／扩增步骤，直至与靶 特异性方面有时优于抗体，并且其靶分子更广泛，性质 分子结合的核酸比例不再升高时终止，此时得到的最 更稳定，制备更简单，无批间差异，因此具有良好的应 后一轮筛选亚文库即为适配子文库。对适配子文库进 用价值，近年来在基础研究、药物开发、临床应用等方 行克隆、测序，制备单一适配子。鉴定各适配子与靶分 面的研究报道不断增多，同时，其筛选技术本身也得到 子结合的特异性和亲和力，优选出有价值的适配子，人 不断发展，适用性、简便性不断改善。本文就适配子筛 工合成供研究应用。 选技术方面的进展作一综述。 ２　ＳＥＬ