第3章 生物样品与样品制备.ppt

第三章 生物样品与样品制备;第一节 生物样品的种类、采集、制备与贮存 一.生物样品的种类、采集和制备 1.血液：血浆、血清和全血 1）血样的采集 A:药物在血液中分布均匀后采样 B:从静脉、动脉和心脏（动物），常用的是静脉采血 C:1-5ml，动物总血量1/10 D:避免溶血 ; 2）血样的制备 A:制备血浆 B:制备血清 C:制备全血 D:血浆和血清的区别 抗凝剂；血浆量（50-60%），血清 量（20-40%）；纤维蛋白原；C血浆=C血清 E:用全血分析 测定细胞内、外液的浓度；血浆中药物浓 度波动大；血浆中药物浓度低而细胞内药物浓度高 F:血样是创伤性获得，尤其是多次采样 G:用于药代动力学、F、血药浓度监测; 2.尿液 用于药物剂量回收、药物尿清除率、生物等效性 A:尿液中原形药、代谢物、缀合物等 B:尿液特点 量大；非创伤性；尿液中药浓度较高 C:尿液缺点 食物饮；水影响；排汗 D:尿液性质 淡黄色；成人日量1-5L；pH4.8-8.0；加防 腐剂贮存 E:采集方法 采集24h尿液：8时排尿弃去，立即服药，尿 液收集容器中，次日8时最后一次收集；分段收集 F:肾功影响药物的排泄；尿药浓度与血药浓度相关性差； 婴儿尿液量难收集; 3.唾液 唾药浓度与血浆游离药浓度相关，药代动力学 A:唾液和唾液腺 唾液由腮腺、舌下腺和颌下腺三腺体分泌 会集而成的，日分泌量约1.2L B:唾液的采集 漱口后15min，安静情况下，用插入漏斗的试 管接收自然流出的唾液，采集时间10min；可用物理和化学方法刺激采集 C:刺激法采集优点 缩短采集时间；减少pH （7.0）范围；药 物浓度个体差异小 D:唾液样品的制备 放置分层后，3000r/min离心10min,取上 清作为药物浓度测定样品 E:唾液采集特点 无痛、简便、经济等成为TDM的研究热点;4.组织 1）匀浆化法 A:组织检材中加入一定量的水或缓冲液，在刀片式匀浆机中 匀浆，取上清液供萃取 B:方法简便，回收率低 2）沉淀蛋白法 A:在组织匀浆中加入蛋白沉淀剂，取上清供萃取 B:方法简便，回收率低 C:常被采用，加入蛋白后上清液清澈，不乳化，杂质??? 3）酸碱水解法 A:组织匀浆中加酸或碱，水浴加热，过滤或离心，上清萃取; B:适合热酸或热碱稳定的药物 4）酶水解法 A:在组织匀浆中加入酶和缓冲液，水浴，过滤或离心，取上清 液萃取 B:酶为蛋白水解酶的枯草菌溶素，可使组织溶解、药物析出 C:优点 可显著改善与蛋白结合紧密的药物的回收率；无乳化 化现象；可避免在酸和热下药物分解；采用HPLC法无需过多 净化;5.头发 A:用于体内微量元素测定 B:可用于用药史的估计 C:毒性药物的检测 6.其他体液 1）乳汁 用市售的吸乳器，取乳汁，3000r/min离心，取上清 供萃取 2）精液 近年有关精液中药物浓度的报道，甚少。;二.生物样本的贮存处理 1.冷藏与冷冻 生物样品量大，需要将其贮存。冷藏4°C，冷 冻-20°C 1）血液和血清样品 采血后及时分离，不超2h，分离后冷藏 4°C或冷冻-20°C 2）尿液样品 应立即测定，不能，应加防腐剂后置冰箱冷藏 4°C或冷冻-20°C 3）唾液样品 A:须测唾液pH值时，应取样后立即测定 B:冷冻的样品，须解冻后测定，解冻的样品应一次性测完 C:冷冻的样品，须解冻后充分搅拌，测定; 2.去活法 1）为防止采样后酶对样品成分进一步分解，需要立即终止酶 的活性 2）常用的方法 A:液氮中快速冷冻 B:微波照射样品 C:抗氧化剂 D:酶活性阻断剂（三氯醋酸） E:匀浆和沉淀 F:样品煮沸;第二节 生物样品的预处理和制备 一 生物样品预处理的目的 1.使药物从缀合物及结合物中释放出来，测定其总浓度 2.生物样品成分复杂、干扰多、含量低。经预处理达到纯 化、富集等目的 3.为了适应和符合测定方法的灵敏度 A:免疫分析法可不作预处理 B:紫外、荧光分析法样品预处理十分必要; 4.为了防止分析仪器的污染、劣化，提高灵敏度、准确性、精密度和选择性 A:生物样本中的脂肪、蛋白、不溶性颗粒等杂质污染仪器