顾振纶—金蝉花孢子粉及野生金蝉花粗多糖—抗肿瘤作用初步报告.ppt

金蝉花孢子粉及野生金蝉花粗多糖抗肿瘤作用初步报告;一、前 言; 蝉花Cordyceps cicadae属虫生性药用真菌，生于蝉蛹体上，是蝉在羽化前，接近地面约3～4cm处，被蝉拟青霉等麦角菌科( Claviceptaceae)真菌寄生的产物。; 其药用始载于南北朝刘宋时代的《雷公炮炙论》。唐慎微所著《经史证类备急本草》言 “蝉花味甘寒，无毒，主小儿天吊，惊痫，夜啼，心悸”。《本草纲目》中亦记载：“蝉花可治疗惊痫，夜啼心悸，功同蝉蜕”。;1. 蝉花的分类;蝉生虫草 其子座聚生至近丛生，从成虫寄主的整个腹部长出，子囊壳斜埋在子座内。 蝉拟青霉 蝉拟青霉又名雌蝉花，属半知菌类或有丝分裂孢子真菌，其孢梗束自虫体头部丛聚成束长出，浅黄色，长 1.5～6.0cm，前端膨大，呈纺锤形。;2. 蝉花的药理作用; ★日本学者Ukai等从蝉花中分离出一种水溶性多糖即半乳甘露糖，它由D-甘露糖和 D-半乳糖构成，二者比例4：3。当剂量为20mg/kg时，对小鼠S180肉瘤的抑制率为47％。 ★蝉花粗提物能选择性杀伤 G2/M期细胞，显著抑制肺癌细胞株 PAA细胞生长。 ;Materials and Methods;1. 药品 人工培养金蝉花孢子粉（孢子粉），批号：101201 野生金蝉花粗多糖（粗多糖），批号：110128 均由上海泛亚生命科学研究院提供 人工培养金蝉花孢子粉醇提物由苏州中药研究所植化室制备。 人工培养金蝉花孢子粉醇提物、野生金蝉花粗多糖 均用DMSO溶解后配成100mg/ml（DMSO含量5‰），4℃保存。;2. 实验用肿瘤细胞（由中国科学院上海细胞库供应）;编号;3. 主要试剂： DMEM（高糖）、MEM及1640培养基，批号：1361834，Hyclone 产品。 胎牛血清（FBS），Hyclone 产品。 四氮唑蓝 (MTT)、胰酶、二甲基亚砜（DMSO）、RNA酶（Rnase）、 碘化丙锭(Propidium Iodide，PI)，均为Sigma产品。 戊二醛、锇酸等制作电镜样本所需试剂，由苏州大学电镜室提供。 Annexin V/PI 双染试剂盒：Biouniquer Technology Co. LTD Wright-giemsa染色试剂盒：苏州金莱生物科技有限公司。 ;4. 主要仪器设备 CO2 培养箱，Napco 5410 型，Napco 公司，美国。 医用净化工作台，YJ-1450 B 型，吴江市设备净化总厂。 倒置显微镜，CKX41，OLYMPUS 公司，日本。 酶联免疫检测仪，DG5032 型，南京华东电子集团医疗装备有限公司。 流式细胞仪，EPICS XL 型，Beckman-Coulter 公司，美国。 荧光显微镜，IX71 型，OLYMPUS 公司，日本。 高速低温离心机，5417R 型，Effendorf 公司，德国。 透射电子显微镜，H-600 型，Hitachi 公司，日本。 扫描电子显微镜，S-4700型，日立公司，日本。 ;三、实 验 结 果;（一）四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测结果;编号;表1-2A 野生金蝉花粗多糖对9株肿瘤细胞生长抑制率的影响 （n=6） ;编号;（二） 瑞氏吉姆萨（Wright-giemsa）染色结果;图2-2 金蝉花对人宫颈癌Hela细胞形态学的影响（A：正常组；B-F：孢子粉；H-L：蝉花粗多糖组；G：5-氟尿嘧啶）;图2-3 金蝉花对人回盲肠癌ccl-244细胞形态学的影响（A：正常组；B-F：孢子粉；H-L：粗多糖组；G：5-氟尿嘧啶）;图2-4 金蝉花对人横纹肌肉瘤RD细胞形态学的影响（A：正常组；B-F：孢子粉；H-L：粗多糖组；G：5-氟尿嘧啶）;图2-5 金蝉花对人胶质瘤LN229细胞形态学的影响（A：正常组；B-F：孢子粉；H-L：粗多糖组；G：环磷酰胺）;图2-6 金蝉花对人胃癌HGC-27细胞形态学的影响（A：正常组；B-F：孢子粉；H-L：粗多糖组；G：5-氟尿嘧啶）; 上述结果表明：人工培