中国林蛙论文中国林蛙细胞色素P45Oc17辛基酚间质细胞.doc

中国林蛙论文：辛基酚对中国林蛙精巢中P450c17（CYP17）表达的影响 【中文摘要】随着工业化的发展,环境内分泌干扰物(environmental endocrine disrupting chemicals, EDCs)不断地被释放到环境中,通过饮食、接触等途径进入机体,对人类及野生生物的生存产生重大影响。辛基酚(octylphenol, OP)是一种重要的酚类环境雌激素,广泛存在于水体、土壤和日常消耗品中,其雌激素活性大约是雌二醇的10-4倍。实验已证明OP可导致精子质量和数量下降,性激素水平和性行为异常,影响雄性生育能力。细胞色素P450c17(CYP17)是类固醇合成途径中的关键酶,在精巢细胞中与睾酮的合成密切相关。有关OP干扰P450c17的研究已有报道,但有关两栖动物水域OP暴露是否影响P450c17 mRNA和蛋白的表达仍未见报道,本实验通过将雄性中国林蛙(Rana chensinensis)暴露于含OP的水体中,检测精巢Leydig细胞中P450c17 mRNA和蛋白的表达水平,探讨OP影响类固醇激素合成的机制,为酚类环境污染物的治理提供依据。本实验将雄性中国林蛙暴露于10-6、10-7、10-8mol/LOP中10、20、30和40 d,10-7、10-8mol/L... 【英文摘要】With the development of industrialization, environmental endocrine disruptors (EDCs) were continuously released into the environment, which had a huge impact on the survival of humans and wildlife by diet, exposure and others. Octylphenol (OP) was an important phenolic environmental estrogen, found in water, soil and daily consumables widely, the estrogenic activity of OP was 10-4 times bigger than estradiol. Experiments had proved that OP could decrease sperm quality and quantity, disorder the balance of s... 【关键词】中国林蛙 细胞色素P45Oc17 辛基酚 间质细胞 【英文关键词】Rana chensinensis Cytochrome P450cl7 Octylphenol Leydig cells 【目录】辛基酚对中国林蛙精巢中P450c17（CYP17）表达的影响 摘要 3-5 Abstract 5-7 第一章 辛基酚对细胞色素P450c17酶影响的研究进展 11-19 1 辛基酚的环境分布及其对动物生殖功能的影响 11-13 1.1 辛基酚的环境分布 11-12 1.2 辛基酚对动物生殖功能的影响 12-13 2 辛基酚干扰内分泌活动的机制 13-14 2.1 OP通过雌激素受体(ER)发挥作用 13-14 2.2 OP通过Ca~(2+)途径发挥作用 14 2.3 OP通过促黄体生成素(LH)受体信号通路发挥作用 14 2.4 OP通过干扰类固醇激素的合成和代谢途径发挥作用 14 3 细胞色素P450c17(CYP17) 14-17 3.1 细胞色素P450c17的分子结构 14-15 3.2 细胞色素P450c17酶的功能 15-17 4 辛基酚对细胞色素P450c17酶的影响 17-18 5 存在问题与展望 18-19 第二章 辛基酚对中国林蛙精巢中P450c17和CYP17的影响 19-45 1 前言 19 2 材料和方法 19-28 2.1 材料 19-20 2.2 动物处理 20 2.3 取材和制样 20-21 2.4 免疫组织化学 21 2.5 cDNA模板的合成 21-23 2.5.1 提取总RNA 21-22 2.5.2 cDNA的合成 22 2.5.3 引物设计与合成 22-23 2.5.4 RT-PCR扩增 23 2.5.5 CYP17 DNA片段纯化 23 2.6 CYP17 RNA探针的合成 23-25 2.6.1 目的基因的克隆与鉴定 23-24 2.6.2 探针模板的制备 24-25 2.7 原位杂交反应程序 25-26 2.7.1 预杂交 25 2.7.