EASYspin 通用植物RNA快速提取试剂盒使用说明书.docx

 PAGE - 4 - 版本号:151204 Hxbio EASYspin Universal Plant RNA Kit 昊鑫生物 EASYspin通用植物RNA快速提取试剂盒/DNase I 目录号：RN52 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次(RN5201)裂解液RPA 室温50 ml去蛋白液RW1室温40 ml漂洗液RW室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O室温10 mlDNase Buffer -20℃1.25 ml x 2RNase free DNase I-20℃0.25 mlRNase-free 吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒按照各成份指示储存12个月不影响使用效果。 储存事项： 常温成份不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍： 独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，DNase直接在柱上消化残留DNA，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 完全不使用有毒的β-巯基乙醇/苯酚/氯仿，也不需要乙醇沉淀等步骤。 简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成，世界上最简单快速的试剂盒。 配套DNase I 柱上消化，得到的RNA不残留DNase消化，可直接用于反转录 荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。 世界领先，是同类产品中适应性最广泛的试剂盒，可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达2.0～2.2，无DNA残留，可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。 注意事项 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。 需要自备乙醇，研钵(可选)。 裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示： 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! 直接研磨法（推荐）: a. 新鲜植物组织称重后取100mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg放入研钵）， 加入1 ml 裂解液RPA室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA立刻充分接触以抑制RNA酶活性。 b. 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13,000rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片。 c. 取480μl裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。 d. 立刻接操作步骤的步骤3。 液氮研磨法: a. 取500μl裂解液RPA，转入1.5ml离心管中。 b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50mg细粉转入上述装有RPA的离心管, 立即用手剧烈振荡20秒，充分裂解。 c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。 d. 将裂解物13,000 rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片。 e. 取裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。 f. 立刻接操作步骤的步骤3。 注意：以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用1ml的裂解液RPA和100mg的样品。 将混合物(每次小于720μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心2分钟，弃掉废液。 确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。 加350μl 去蛋白液RW1，室温放置1分钟，13,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 DNase I工作液配制：取45μl