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2011免疫學技術(研究生)
第十四章 免疫学检测技术;经典的免疫学方法:
一、凝集反应(agglutination)
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结
合后形成凝集团块的反应。
1、直接凝集反应
2、间接凝集反应
3、间接凝集抑制反应;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;二、沉淀反应(precipitation)
血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶
性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物的反应。
1、单向免疫扩散(single immunodiffusion)
2、双向免疫扩散(double immunodiffusion)
3、免疫电泳(immunoelectrophoresis)
4、火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis)
5、免疫浊度测定(immunonephelometry);Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;免疫浊度测定:
可溶性Ag+Ab,二者比例合适时,在特殊的缓冲
液中快速形成一定的AgAb复合物,使反应液出
现浊度。
透射比浊法
散射比浊法
速率散射比浊法
终点散射比浊法;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;一定要保持抗体过量,以维持抗原-抗体复合物的相
对不溶解性。
;该方法的分析范围主要检测的是血浆、体液
中特定蛋白系列。如Ig、补体、血浆蛋白、
炎性反应蛋白、一些小分子量的治疗性药物
浓度等。
;第一节 免疫学检测常用标记技术;免疫标记技术(immunolabelling technique)
指用荧光素、放射性核素、酶、发光剂或电
子致密物质(胶体金、铁蛋白)作为示踪剂标
记抗体或抗原进行的抗原—抗体反应。
优点:高灵敏度、特异性、快速,能定性、定量、定位测定,易于观察结果并适合自动化检测。
总体分为:免疫组化:定位检测组织或细胞中的
Ag/Ab
免疫测定:定量检测液体标本中的
Ag/Ab
也可分为:荧光免疫技术,放射免疫技术,酶免疫技术,化学发光免疫技术及免疫金标记技术等。
; 一、酶免疫技术
基本原理:以酶标记抗体(或抗原)用于免疫检
测,通过相应底物被酶解后的显色反应,对标本中的抗原/抗体进行定量、定位分析。
标记物:酶(催化底物:生物放大作用)
特点:灵敏度高、特异性强、准确性好,酶标记试剂能够较长时间保持稳定,检测方法简便安全易行,容易与其他技术偶联衍生出适用范围更广的新方法。;(一)常用的酶和酶作用底物
1、辣根过氧化物酶(HRP)
HRP来源于植物辣根中,分子量40KD,由主酶
(糖蛋白)和辅基(亚铁血红素)组成的复合物。
HRP常用的底物有:
(1
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