第2章天然药物化学成分提取分离鉴定方法与技术(色谱法).pptVIP

第二章;;*;色谱法（Chromatography）;色谱的三要素;按原理不同可分为： 吸附色谱法* 分配色谱法* 离子交换色谱法 凝胶滤过色谱法（分子筛滤过色谱） 大孔吸附树脂法 高效液相色谱法（自学） 气相色谱法（自学）; 吸附色谱法 *（Adsorption Chromatography );*;3）吸附色谱的三要素;溶 解 能 力;*;*;*;氧化铝（aluminium oxide）;聚酰胺（polyamide） 结构：--[CH2-CO-NH-]-n 原理：氢键吸附学说 ;*;;活性炭（activated carbon）;b、溶 剂 （移动相）;四、操作方式;1）薄层色谱的吸附剂和支持剂：;常用的硅胶吸附剂;;2）薄层色谱的一般操作;操作技术——手工铺板;;操作技术——点样;;C、展开;;;*; 定义：样品经色谱分离后，某成分从原点至该成分斑点中心的距离与从原点至展开剂前沿的距离的比值称为该成分的比移值（Rf值）。 原点至色谱斑点中心的距离 比移值（Rf值）＝ 原点至展开剂前沿的距离 ;0.2-0.8;上样量大，常用于制备分离，是分离天然化学成分最常用的方法。;其原理、吸附剂及洗脱剂的选择与薄层色谱法相同。 操作步骤： 注意点：上柱的样品须经过纯化处理（过滤、萃取、脱色、沉淀等） ;1）装柱;a、干法 b、湿法：因湿法装柱容易赶走硅胶内的气泡，故一般以湿法装柱较好。 ;2）上样;① 梯度洗脱：洗脱剂极性从小到大。 ② 洗脱剂液面高度始终要高于柱面。 ③ 控制洗脱剂流速为匀速。 ④ 有色成分收集各色带洗脱液。 ⑤ 无色成分则采用等分收集。 ⑥ 浓缩洗脱液，薄层检识后合并相同流分。混合 成分则进一步分离。;;*;溶 解 能 力;二、分配色谱中的固定相和流动相 固定相：被支持剂固定的溶剂。 流动相：与固定相不相混溶的另一相溶剂。;三、支持剂（载体、担体） 在分配色谱中起到支持和吸着一定量固定相的作用，本身无吸附作用。 要求：不与被分离成分反应。 不溶于两相溶剂中。 常用支持剂： 含水硅胶、硅藻土、纤维素、滤纸;适用范围： 正相分配色谱：亲水性成分和弱亲脂性成分 反相分配色谱：强亲脂性成分;1、正相分配色谱： 支持剂：硅胶等 （硅胶吸水＞超过17％，不作 吸附剂，而作为载体） 固定相：强极性溶剂，如水、缓冲液等 流动相：氯仿、乙酸乙酯等弱极性亲脂有机溶剂 洗脱规律：;2、反相分配色谱： 支持剂：硅胶、纤维素粉、滤纸等 固定相：亲脂性极性小的有机溶剂，可用石蜡油、反相硅胶RP-18、RP-8、RP-2 流动相：水或甲醇等强极性溶剂 洗脱规律：;表2、分配色谱的类型;*;*;3、纸色谱法（PC） 系以纸为载体，以纸上所含水分为固定相，用展开剂进行展开的分配色谱。 支持剂：滤纸（纤维素） 固定相：水 流动相：水饱和有机溶剂;*;离子交换色谱法（Ion exchange chromatography）;;适用范围： 分离具有解离能力的酸性、碱性及两性化合物，如生物碱、有机酸、酚酸、氨基酸等。;水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离;凝胶过滤色谱法（Gelpermeation chromatography） ;*;大孔吸附树脂色谱;*;*;一、高效液相色谱法 在经典柱色谱法基础上发展起来的一种具有高效、快速、高灵敏特点的色谱分离方法。;二、气相色谱法 流动相：气体 固定相：液体或固体 基本原理： 利用化学成分在气体与固定相之间吸附能力不同或分配系数不同的差异而分离的色???分离方法。 适用范围：沸点低、易挥发的挥发油类成分。;思考题;3、根据不同性质的化学成分，用连线选择与其相适应的色谱分离方法： 氧化铝吸附柱色谱法 分子量大小不同的化合物 凝胶滤过柱色谱法 碱性亲脂性化合物 聚酰胺吸附柱色谱法 黄酮类化合物 离子交换色谱法 酸性亲脂性化合物 硅胶吸附柱色谱法 离子性化合物;谢 谢 ！