14.遗传病断诊2013.ppt

Diagnosis of Genetic Disease;[教学要求];产前诊断 (prenatal diagnosis) 植入前诊断 (preimplantation diagnosis) 症状前诊断 (presymptomatic diagnosis) 现症病人诊断 (symptomatic diagnosis);临床诊断 ;第一节 遗传病的临床诊断;一、病史采集;二、症状和体征;二、症状和体征;二、症状和体征;三、系谱分析 ;系统性、完整性和可靠性 不规则显性、延迟显性、从性显性等特殊现象 新的基因突变 显性与隐性概念的相对性 ;四、遗传数据库资源应用 ;四、遗传数据库资源应用 ;第二节 细胞遗传学检查;取材：视检查对象和目的而有所不同，通常主要取自外周血、皮肤、骨髓、胸、腹水、绒毛、羊水中胎儿脱落细胞和脐血等各种组织。 体外细胞培养 制片：秋水仙素处理，收获细胞、低渗、固定、滴片等过程，制备染色体标本。 显带 核型分析;① 不明原因的智力发育不全、生长迟缓者； ② 先天性畸形（包括两性内外生殖畸形）； ③ 性征发育异常及生育异常： 原发性闭经和女性不孕症； 无精子症和男性不育症； 有反复多次早期流产史的妇女及其丈夫； ④家族史：家族中有染色体异常或先天畸形的个体。 ⑤ 有较长时间、较大剂量射线或致畸致突变物质接触者； ⑥ 恶性肿瘤，尤其是恶性血液病患者。 ;二、性染色质检查 ;第三节 生物化学检查;苯丙酮尿症, PKUⅠ; 1978年，美国科学院院士美籍华裔科学家YW Kan(简悦威 )和Dozy应用液相DNA分子杂交成功地进行了镰状细胞贫血症的基因诊断，标志着检验诊断进入基因诊断时代。;第四节 基因诊断(gene diagnosis);基因诊断概述;基因诊断的一般流程;对基因检测结果的理解;遗传病基因诊断的分类;二、基因诊断基本方法;分子印迹杂交(Southern blotting)的基本方法：DNA标本用限制性内切酶消化→琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段→DNA转印至硝酸纤维素滤膜→标记探针杂交→显影→确定探针互补的每条DNA带的位置，以确定在众多酶解产物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。 ;2．聚合酶链反应分析 ;（1）产物探针检测 ——ASO探针 ;（2）产物构象变化检测-SSCP;基因缺失时可导致靶DNA模板的缺失，使用特异性引物扩增时得不到相应的扩增产物，因此可以直接检测缺失。 ;;RFLP的主要步骤: DNA→酶切→Southern印记杂交分析 DNA→PCR →酶切→电泳分析;正常人（HbA）和镰状细胞贫血患者 （HbS）β珠蛋白基因的结构差异 ; ? ?? ??1 ?2 ?1 5‘ 3’; PCR-RFLP检测基因缺失和插入的示意图 ;案例9-2基因诊断分析(P99) ;3．DNA 测序 ;DNA自动测序仪生成的序列;??概念：基因芯片技术是DNA杂交探针与半导体工业技术相结合的产物。将各种探针固定于支持物上后与带有荧光标记的DNA样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号，进而获取被测样品中DNA分子的数量和序列信息。该技术可用于大规模筛查由基因突变引起的疾病。;检测原理和步骤： （1）制作芯片：根据疾病基因中的突变位点区域的核苷酸序列，合成20个核苷酸长的探针，将其固定于芯片上，芯片上可固定成千上万个探针。 （2）从被测对象的细胞中提取DNA，用酶切成较小的片段，对DNA作荧光标记，并熔解成单链。 （3）将样品滴加到芯片上并与芯片上的探针杂交，凡是与探针互补的酶切片段会固定于特定位置上，不能互补的片段会被洗脱掉。 （4）对芯片上的荧光???扫描和分析。;非放射性原位杂交方法 用特殊荧光素标记DNA探针，在染色体、细胞和组织切片标本上进行DNA杂交，检测细胞内DNA或RNA的特定序列存在与否。 ;案例19-1 ;基因异常;[教学要求];