第3章真菌感染实验诊断.pptVIP

第三章真菌感染实验诊断;一、真菌的形态特性;菌丝和孢子的形态因菌而异，是鉴定 真菌的重要依据。孢子又分为多种， 如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子 等。 ; 二、真菌菌落特性;1．酵母型菌落 是单细胞真菌的菌 落，形态与细菌菌落相似，较大， 表面光滑湿润柔软、边缘整齐， 如新生隐球菌。 ;2. 类酵母型菌落 如白假丝酵母菌， 形成假菌丝，伸人培养基中。;3．霉菌型菌落 是多细胞真菌的菌 落。菌落呈棉絮状、绒毛状，并 产生不同的色素，如皮肤癣菌。 ;第二节 标本采集及检验程序;2．各种分泌物和排泄物：生殖道 分泌物、耳垢、痰、粪便、尿 液等。 ;3．血液和体液：体液包括胸水、 腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。 4．脓汁及渗出物。 ;(二)采集标本注意事项;2．在用药前采集标本 一般真菌 标本须在用药前采集，对已用 药者则需停药一段时间后再采 集标本。;3．采集的标本量要足 血液和脑 脊液标本5ml，胸腔液20ml， 皮屑标本两块，活体组织两份 (一份送病理科检查，一份作 镜检和培养)。 ;4．严格无菌操作 并进行消毒处理， 尤其是采集血液和脑脊液标本， 要避免污染杂菌。 5．采集标本立即送检 深部真菌标 本最长不得超过2h。 ;第三节 真菌检验;直接镜检的意义;③判断某些真菌种的致病性等,如 皮肤癣菌、曲霉等。;直接镜检也有局限性： ①阴性结果不能排除真菌感染； ②有假阳性结果。 因此，对直接镜检可疑结果应 作复查或用其他检验方法鉴定。 ;(二)抗原检测; 用胶乳凝集试验检测标本中的白 假丝酵母菌甘露聚糖抗原。 用胶乳凝集试验和ELISA检测血 清和脑脊液中的隐球菌多糖荚膜抗 原，在治疗前检测非常敏感特异。; 用半定量放射免疫法检测血清、 尿液和脑脊液中荚膜组织胞浆菌循 环多糖抗原，可快速诊断。 ;二、真菌的分离培养;①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小，病原性真菌菌落小， 而条件致病性真菌菌落大；;③菌落颜色 病原性真菌颜色淡， 污染真菌颜色深； ④致病性真菌菌落下沉，有时使 培养基开裂；污染性真菌菌落 不下沉,很少引起开裂。 ;三、真菌的生化反应;2.同化碳源试验 含菌生理盐水 与已融化的固体同化碳源培养 基(45℃)混合，然后在培养基 上分别加糖，置25℃孵育观察 结果。若24h后无变化可重复 加糖。如能同化周围有生长圈， 否则无生长。 ;3.同化氮源试验 同化碳源试 验相同，但需用无氮源的培 养基，不要加糖类，而加入 硝酸钾。 ;四、动物实验;五、核酸检测 ;（一)G+Cmol％分类鉴定法;(二)真菌核型的脉冲电泳分析;原理：PFGE有两个方向的电场在设 定的脉冲时间里交替变换，使大分 子DNA在移动中不断改变自己的形状 及迁移方向，从而绕过细小的凝胶 孔隙而得以分离。较大的DNA分子泳 动慢些，较小的快些，有许多因素影 响电泳带型，分离真菌等大分子量的 DNA宜用较低电压和较长脉冲时间。;用PFGE分析真菌核型，可直接比较 其遗传背景,从电泳核型差异中进行 分类鉴定,又能取得基因结构的基本 数据，构建出大尺度物理图谱。 ;(三)随机扩增多态性 DNA(RAPD)分析;六、真菌毒素的检测;检测真菌毒素有许多方法，如检测 黄曲霉毒素有生物学方法和ELISA法 等。生物学方法主要用于检测真菌 毒素的毒性，如用鸡胚、小??鼠作 毒性试验，观察动物中毒死亡或出 现肿瘤。ELISA法操作简便，并具有 安全快速高效、费用低，适用于大 批量标本的筛选。