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实验4细菌质的粒接合转移
实验四 细菌质粒的接合转移 ;一:目的要求;二:基本原理;;1.转移型质粒:多为低拷贝的大质粒,含有完整的转移操纵子基因(tra)和转移起始位点。能在同种或亲缘关系近的菌体细胞间进行转移。例如:
大肠杆菌:F因子、R1、R100、R6K、RP4……
天蓝色链霉菌:致育性因子pSCP1、pSCP2……
2.非转移型质粒:多为高拷贝的小质粒,如大肠杆菌的ColE1、RSF1010等。由于缺少转移基因(tra),不能自主转移,但由于含有与F质粒类似的bom(或nic)位点或诱动基因mob(mobilization),因而能被带有tra基因的转移性质粒诱动而发生转移。 ;;;转移子的筛选;三:实验菌株;四:实验内容 ;用可调定量移液器吸取供体、辅助菌各 0.4ml,吸受体菌0.6ml,都加入同一eppdorf管内(每个同学做1管),放入离心机内,10000转/min 离心1分钟。
倒上清,向沉淀加 1ml 的 TY液体,用 tip上下抽吸,洗涤菌体,再10000转/min离???1分钟,倒上清,留100μl左右用于悬浮菌体。
倒TY平板,然后用镊子取灭菌滤纸片贴于已准备好的TY平板上(每2个同学1片,2-3片/平板)。用200μl的 tip 抽吸eppdorf管内沉淀的菌体,打散成浓菌液,将之加到滤纸片中央(切勿倾斜平板,以免菌液流出滤纸片以外),吹干。
28℃培养2天。 ;倒SM平板;向灭菌青霉素瓶中加3ml无菌水,将已培养的TY平板上的滤纸片用无菌镊子放入水中,在震荡混匀器上洗菌体,充分打散。
向1ml的ep管加 0.9mL无菌水,取0.1ml菌液,混匀。 吸取 200μL涂皿。
少数同学另取稀释液,涂1板不加Tc的SM做对照 。
平板放28 ℃培养4-6天后看结果。;五:实验报告内容;六:思考题
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