第19章 平面色谱法.ppt

平面色谱法 （plane chromatography);第一节 概述;一、平面色谱法的特点;二、平面色谱的主要技术参数;1、平面色谱定性参数及相平衡参数关系;讨论 Rf与K有关，即与组分性质、平面板和展开剂的性质有关 K↑大，Rf↓小 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是平面色谱基本定性参数，说明组分保留行为 Rf范围：0 Rf 1 Rf = 0.2~0.8（常用）；0.3~0.5（最佳）;相对比移值Rs ;2、平面色谱分离评价参数;TLC分离度与比移值的关系;3、平面色谱板效参数;三、平面色谱法操作流程图;一、概述;二、吸附薄层色谱材料;1.硅胶：最常用的吸附剂，SiO2·XH2O;1）物质极性↑，吸附能力↑ →强极性吸附中心，不易洗脱 2）吸水→占用活性位点→失活 105~110OC烘干30min(活化)，吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)→无吸附力;碱性（pH 9~10）: 分离碱性及中性化合物。如生物碱等。 酸性（pH 4~5）: 用于分离酸性中性物质。如酸性色素、氨基酸等。 中性（pH 7.5）: 用途最广，适于分析酸性碱性和中性物质，如生物碱、挥发油、甾体等。;吸附的原因——氢键。 吸附强弱： 五级，级数高，含水量大，吸附力弱; 常用的是聚己内酰胺，商名为锦纶、尼龙-6、卡普隆等。 吸附的原因——氢键 聚酰胺分子内存在着许多酰胺基，可与酚、酸、醌等形成氢键;;;含粘结剂固定相： 硅胶G——含13%~15%煅石膏 制备硅胶G——含30%煅石膏 氧化铝G——含9%煅石膏 不含粘结剂固定相：硅胶H;2）有机粘结剂： 羧甲基纤维素钠（CMC） 0.8%CMC溶液配匀浆涂铺的薄层板强度高，色谱分离性能好 注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解;作用：适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光背景，清晰显示化合物的暗斑 短波荧光指示剂： 254nm 锰激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿 长波荧光指示剂： 365nm 银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝; 硅胶H——不含粘合剂 硅胶G——硅胶和煅石膏混合而成 硅胶HF254——不含粘结剂，含荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景 硅胶GF254——同时含粘结剂和荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景 硅胶HF254+365——不含粘结剂，含荧光剂 254 nm和356 nm呈现荧光背景; 被分离物质的极性 展开剂的极性 吸附剂的活度;1、被分离物质的极性; 石油醚 环己烷 二硫化碳 三氯乙烷 苯 甲苯 二氯甲烷 氯仿 乙醚 乙酸 乙酯 丙酮 正丁醇 乙醇 甲醇 吡啶 酸;极性化合物——选用吸附活性小的（活度级别大的）薄层板，极性大的强洗脱剂展开 非极性化合物——选用吸附活性大的（活度级别小的）薄层板，极性小的强洗脱剂展开;4、TLC色谱条件选择原则;四、薄层色谱操作过程;四、薄层色谱操作过程; 薄层放置110℃烘30min，干燥器中备用 吸附剂活性越高，活性级别越低； 最好二级或三级 不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化;3、点样;点样原点应小而圆，距板边缘2cm 多次点样（每次挥干后），防止边缘效应 点样量勿超载，防止拖尾 点样勿伤及薄层表面;4、展开;5、定位;——日光，紫外光，显色剂显示 ——测出Rf值 相同条件下展开，与已知标准物质对照进行定性鉴别。;7、定量分析;1、薄层扫描法检测茶碱中毒者血清中茶碱浓度 2、TLC同时测定10种精神???定药物血药浓度 3、异烟肼中毒快速检验 4、尿液中利福平的测定 5、薄层扫描法测定血浆中的度冷丁;2010版药典（二部）采用TLC的品种数量，共435个;2005年版收载薄层色谱定性鉴别1507项 2010年版新增薄层色谱定性鉴别2494项;北五味子与南五味子的薄层色谱鉴别;白芷;第三节 纸色谱法;固定相：纸上所含水分或其他物质 流动相：水不互溶的有机溶剂 （饱和正丁醇） 分离机制：同液-液分配色谱 分离对象：极性化合物，如糖类;