糖苷 演示文稿3.pptVIP

四、苷分子中苷元和糖、糖和糖之间 连接位置的确定 （一）苷元和糖之间连接位置的确定 1、通过化学降解或酶解所得产物 ※2、通过NMR谱-尤13C-NMR： 判断端基碳原子-苷化位移规律（GS） ①苷元羟基的成苷碳原子（α碳） 与其相邻的碳原子（β碳）的信号发生位移， ，; 而其它距苷键较远的碳原子的信号几乎不变； 同时苷分子上的糖部分，其端基碳原子的信号与游离单糖端基碳信号比较，也发生了位移（苷化位移规律-GS） ②苷元羟基性质不同，位移方向不同 ＊醇类羟基： 苷元α碳低场移(4-10ppm) β碳高场移(-0.9—4.6ppm);＊酚类羟基： 苷元α碳高场移 β碳低场移 比较苷和苷元碳谱-找出苷元与糖连接处 ;3、近年2D-NMR谱中HMBC谱已广泛应用 可确定糖和苷元的连接位置 （二）糖与糖之间连接位置的确定 化学法及光谱NMR法 ;1、化学法：甲基化→甲醇解 ;＊苷的甲基化反应常用的方法四种： 经典两种 ①Haworth法：试剂，较弱、需多次反 应、 ②Purdie法：试剂，不能用于还原糖 半微量现代法两种 ①kuhn改良法：试剂，反应较缓慢 ★ ②Hakomari法（箱守法）：试剂， ; 室温连续、反应迅速完全、无需 特殊装置。最常用。 2、NMR法： ①应用碳谱的苷化位移规律 如:苷中两单糖的连接位置,可将该糖的碳 谱数据与单糖比较-内端糖连糖的碳原子 会向低场移4～7,其相邻两碳略高移1～4 ②应用HMBC谱也十分有效而常用. ;五、苷中糖和糖之间连接顺序的确定 -部分水解法和波谱解析法 （一）部分水解法 1、缓和酸水解 试剂-低浓度无机强酸或中强度的 有机酸;2、全甲基化→甲醇解 3、乙酰解 （二）波谱分析 1、MS法 EI-MS中：全乙酰化、全三甲基硅 醚化物等的MS谱中，有各种特征 性的糖基离子峰，全乙酰化的单糖 及低聚糖的特征性的碎片离子峰， 可证明糖链及末端糖。; FD-MS，或FAB-MS谱中，有各种脱去不同程度糖基的碎片离子峰，证明糖与糖的连接顺序。 例如：人参皂苷Rb2(P67) ;2、NMR法 ① 13C-NMR ② 碳原子的自旋-驰豫时间（T1）的 大小。 苷中糖的NT1随糖链距离的增加而 增加 ;六、 苷键构型的确定 （一）利用酶水解 麦芽糖酶 → α-苷键 苦杏仁苷酶 → β-苷键 （二）利用Klyne经验公式进行计算 计算公式：(表3-3糖甲苷分子比旋数值） ;实例：豆甾醇-D-葡萄糖的苷键构型 豆甾醇-D-葡萄糖的 [α]D (旋光度)=-47.56° M=574 ;△[M]D =[M]D苷-[M]D苷元 =-273.03-(-210.04°)= -62.99 查表可知: α-D-葡萄糖甲苷的 [M]Dα =+308.6° β-D-葡萄糖甲苷的 [M]Dβ =-66.4° -62.99与-66.4°接近 ∴可确定其苷键为β构型;（三）利用NMR谱确定苷键构型 1、1H-NMR（PMR）法： 组成苷的糖上端基质子的偶合常数判 断苷键的构型。 可直接对苷进行测定 糖上端基质子与其它质子相比较,较低场 如葡萄糖苷(糖为优势构象)的透视式和 部分纽曼式中 ;2、13C-NMR法（CMR） 利用δ、J 值推测苷键构型 ① 糖与苷元连接后，糖中端基碳原子 的δ值明显增大，其它变化不大； 某些α-和β-构型的甲苷中， 端基糖碳原子δ值常相差很大(下图) ;表3-4几个α-和β-甲基吡喃糖端基碳的δ值（溶剂D2O）-大多相差4;②利用C谱的J 值推测苷键构型 (表3-5) 几种糖甲苷α和β构型的JC1-H1值 ;3、二维NMR法 利用NOE相关峰即可确定苷键的构型