感染疾病的分子诊断.ppt

感染性疾病的分子诊断;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。估计世界人口中1/3感染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善，特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降低。但应注意，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;（一）结核分枝杆菌;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;乙型肝炎病毒简称乙肝病毒。是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科（hepadnavividae）。 根据目前所知，HBV就只对人和猩猩有易感性，引发乙型病毒性肝炎疾病。完整的乙肝病毒成颗粒状，也会被称为丹娜颗粒（Dane）。1965年由丹娜发现。直径为42纳米。颗粒分为外壳和核心两部分。;1.生物学特性及致病性 HBV对外界环境的抵抗力较强，且传染性较强 输血或注射是重要的传播途径 HBV感染后潜伏期约2～6个月，HBV DNA在肝细胞内以游离DNA和整合到宿主细胞染色体的方式存在 HBV分为8个基因型，A～H型 ;2.乙型肝炎病毒核酸的检测 ; （2）支链DNA（bDNA）技术： 一种核酸探针杂交标志信号放大技术 。 优点：稳定性和重复性较好，结果准确，操作简单， 将待测病毒裂解释放核酸后变性为单链，即 可进行检测 。 缺点：敏感性较低、检测范围窄而不适用于低水平病 毒的检测 。;还可以用于乙肝病毒基因检查的方法主要有：荧光PCR法、竞争PCR法、PCR酶联免疫吸附法、荧光标记物法和PCR酶联化学发光等方法。 ;3.变异株与耐药突变检测 ;HBV耐药突变类型及其核苷酸、氨基酸变化 ;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV），顾名思义它会造成人类免疫系统的缺陷。1981年，人类免疫缺陷病毒在美国首次发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒（Lentivirus），属反转录病毒的一种。至今无有效疗法的致命性传染病。该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统的失去抵抗力，而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病（获得性免疫缺陷综合征）。;1.形态结构与致病性 HIV根据血清学反应和病毒核酸序列分为 HIV-1型、HIV-2型 HIV结构分为 包膜、核心 ;HIV直接或间接损伤CD4+T细胞 HIV抑制抗原递呈细胞功能 HIV诱发自身免疫性疾病及诱导细胞凋亡 HIV导致CD8+T细胞丧失抗病毒活性等 ; 原位杂交 PCR NASBA技术 bDNA技术 荧光定量RT-PCR技术 ;（四）SARS冠状病毒;SARS相关冠状病毒的检测 WHO推荐SARS-CoV特异性检测方法： 分子生物学检测 免疫学检测 细胞分离培养;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;（五）人禽流感病毒;　　近年来，由H5N1亚型禽流感病毒引起的疫情广泛传播对人类的健康造成全球性的重大威胁。由于病毒的不断变异，开发新型抗流感药物成为各国极为迫切的重大课题。其中，揭示与流感病毒密切相关的蛋白质的三维结构不仅对揭示流感病毒复制机制具有重要科学意义，而且对开发抗流感病毒药物具有重要价值。最近，由中科院生物物理研究所刘迎芳研究员领导的研究组和饶子和院士领导的研究小组在这一领域取得突破性进展，他们在国际上率先揭示了流感病毒聚合酶关键部分PA亚基与PB1多肽复合体的精细三维结构。 ;（五）人禽流感病毒;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查; IS6110-RFLP分型方法要比基于PCR的分型方法需较多的菌株材料，以产生足够的DNA用于分析。这要求基因分型实验室将菌株接种到培养基中，然后等待足够的培养物长出。与PCR