抗原-抗体的相互作用-免疫学检测.ppt

第七章 抗原与抗体的相互作用及免疫学检测;体液免疫的基础是抗原和抗体分子的结合，这种结合可以是游离形式的，也可以结合在细胞表面。 通过抗原抗体的结合继发出各种生理效应，如：溶细胞效应、促吞噬作用、凝集作用、沉淀作用、调节作用等，形成一整套机体体液免疫功能。 抗原决定簇与抗体结合部位的结合，要求分子结构有互补性，也因此具有高度的特异性。;第一节 抗原与抗体反应的特点;抗原抗体分子间的作用力，即亲和力包括以下几种： 1、盐键（离子键） 2、范德华力 3、疏水作用 4、氢键;;三、抗原与抗体反应中量的关系 当抗体与抗原结合时，如果是颗粒抗原，则出现凝集现象；如果是可溶性抗原，则产生沉淀作用。这些可见现象的出现是以抗原与抗体反应特异性和亲和力为基础的，同时也是抗原抗体反应的继发过程。 当抗原与同型抗???相遇时，在合适条件下，不论彼此量的多少，都立即发生特异性的结合形成抗原抗体复合物，这一过程通常只需要几秒的时间便可完成，称为反应的一级阶段。;;;抗原抗体凝集（沉淀）反应形成的特点：;第二节 抗血清的制备和抗体的纯化; 当抗原初次进入具有应答能力的动物体内后，经过一段较长的潜伏期才出现抗体，又经过一段高峰期后，抗体量逐渐下降直至消失。这段时间总的抗体量是较低的，主要成分是IgM，此为机体对抗原的初次反应。但当抗原再次进入该机体时，血清中抗体很快出现，含量也远高于初次反应，其抗体成分主要是IgG，此为再次反应。;佐剂在抗血清制备中的作用： 由于佐剂有吸附和包埋抗原的“储藏所”作用，延长了抗原在体内的存留时间，便于抗原较长时间的、不间断的刺激机体免疫系统，使初次反应与再次反应结合在一起，其免疫效果更为理想。另外，在佐剂中含有激活巨噬细胞等生理功能的卡介苗类物质，可提高抗原的免疫原性，因此要获得高效价的抗血清，常使用各种类型的佐剂。;;一、动物的免疫;二、抗血清制备和抗体效价测定;三、免疫球蛋白的纯化;;2、Cohn冷酒精沉淀法：;;3、硫铵盐析和DEAE-纤维素柱层析法纯化IgG 在pH7.5的溶液中IgG带正电，其他血清蛋白带负电，因此阴离子交换剂DEAE-纤维素可以一次将IgG提纯到很高的纯度;4、IgM的纯化方法：18%饱和度硫铵沉淀+DEAE-纤维素柱层析法。;第三节 抗原与抗体反应-免疫检测法;一、凝集反应;二、沉淀反应;3、双向扩散：又称琼脂扩散，是利用琼脂凝胶作介质的一种沉淀反应。 琼脂是多孔的网状结构，可使大分子物质通过，分子的扩散作用使分别两处的抗原抗体相遇，比例合适时形成沉淀。可观测到沉淀弧。 沉淀弧的特征与位置取决于抗原分子的大小、结构、扩散系数和浓度等。当抗原、抗体存在多种体系时，会出现多条沉淀弧。;双向扩散法的操作：生理盐水配制1%-5%的琼脂，取4mL倒在显微镜用的载玻片上，凝固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入抗体用于测定抗体效价，中心孔滴入抗体，外周孔滴入抗原，用于检测抗原的存在和定性抗原。;;4、单向免疫扩散：又称单向琼脂扩散，是定量抗原的一种检测方法。与双向扩散不同的是在琼脂中含有一定量的抗体，孔内加入未知量的相应抗原。在37度保温过程中，孔内的抗原向周围扩散，与抗体形成沉淀圈。根据沉淀圈的大小确定抗原的含量;;三、补体结合试验;;;四、荧光抗体技术;;第四节 免疫亲和层析;亲和层析???的基本过程： 1、偶联：将欲分离的高分子物质的配基在不影响其生物功能的情况下与水不相溶性的载体结合，制成亲和吸附剂或免疫吸附剂。 2、装柱：在层析柱内装入固相化的配基 3、亲和层析：含有高分子物质的混合液在有利于配基和高分子之间形成复合物的条件下进入装有亲和吸附剂的层析柱。高分子物质结合留在柱内，其他杂质流出。 4、洗脱：改变条件，促使配基和高分子物质分离而释放出需要的物质。 5、再生：将亲和层析柱的充分洗涤再生，用于下一周期的纯化工作。;;