抗菌药物筛选的实验方法-的技术教案.ppt

综合化学实验-化学生物学专题实验;一个新的化合物或分离提取有效成分是否有抗菌作用，需要药理实验来证实，首先采用体外实验方法，观察试验物对细菌有无杀灭作用或抑制作用，体外实验的重要性在于方法简便，用药量少，短时间内能判断药物抗菌的广度和强度，为深入体外实验和体内药效研究提供数据。 体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。体外实验是细菌与药物直接接触，没有机体诸因素参与，故体外和体内实验的结果不一定完全一致，需两方面综合分析进行评价。;一、实验目的;二、微生物培养基的配制、灭菌与培养;（一）基本原理;（二）实验过程;2，培养基的分装 液体培养基装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至试管高度1/4左右为宜（约5ml）； 分装团体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中分装量为管高1/5(约4-5ml)。;3，棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎 （1）试管棉塞的制作 制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一快，铺展于左手拇指和食指如成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。 将装好培养基并塞好棉塞或盖好管帽的试管捆成—捆，外面包上一层牛皮纸。用铅笔注明培养基名称及配制日期。灭菌待用。;4，培养基的灭菌 高压蒸汽灭菌是微生物学实验、发酵工业生产、以及外科手术器械等方面最常用的一种灭菌方法。 （1）打开灭菌锅盖，加适量水； （2）将待灭菌物品放入灭菌桶内。（3）将盖上的软管插入灭菌桶的槽内，加盖，上下螺栓口对齐，均匀旋紧螺栓，使锅密闭。 （4）打开放汽阀，加热，自锅内开始产生蒸汽后再关紧放汽阀，待压力逐渐上升至所需温度时，控制热源，维持所需压力和温度，并开始计时20 min后停止加热。 （5）待压力降至接近0时，慢慢打开放汽阀(排汽口)，开盖，立即取出灭菌物品。;5，斜面和平板的制作 将巳灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面(图1-3)斜面长度不超过试管长度1/2为宜。;平板的制作 ;6，斜面培养基接种 斜面培养基接种法一般不用作分离培养，仅使细菌繁殖为菌种传代或观察其某些生化特性之用。 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞。;7，液体培养基接种法;三、微量稀释法体外抗菌实验;(一）实验过程;筛选实验过程;96孔细胞培养板加样安排;试验用样品;筛选数据分析;筛选数据分析;（4）最小抑菌浓度或EC50的测试 ;样品稀释后的浓度表;（二）数据处理与分析; 2，实验中，不同稀释的样品浓度的测试结果没有上面的现象，而是出现规律性的上升。即，这种样品测出的数据是随着样品浓度的下降而上升，可以根据其数据画出一条细菌的生长曲线，如果对照样的值定为100%，可以从曲线上求出抑制50%时样品的浓度，所以，我们称这种 抗菌为抑菌作用，表明该化合物不能杀死细菌，但可以抑制其生长。;四、琼脂扩散法;图:标准曲线法 图 ：链霉素标准曲线 双碟、钢管与抑菌圈位置图S：标准品T：供试品 抑菌圈直径(mm);（一）滤纸片法实验过程;效果评价;四、实验安排;五、实验注意事项