再生组织培养的水稻第1在1968年报道.docVIP

建立一个高效率的农杆菌介导的转化的 水稻制水稻（Oryza sativa L.） 作物耐冷性研究团队，国家农业研究中心北海道地区，羊丘，丰平区，札幌，北海道062-8555，日本 文章历史： 收到2008年10月23日 修改稿1月14日收到2009年 接受九年一月十五日 可在线2009年1月31日 关键词： 水稻 农杆菌介导的转化 液体介质 摘要： 已开发的技术用于水稻转化，以满足功能性的要求 基因组中，以使生产的转基因稻植物的有用的农业字符。 然而，许多水稻品种都不能有效地通过农杆菌转化。我们已经成功 通过合作培育水稻愈伤组织在饭建立一个高效转化系统 蘸有丰富N6orDKN mediains一个grobacte riumon三滤论文teado固融合 媒体。水稻愈伤组织浸入农杆菌悬浮液（EHA101，农杆菌浓度 OD 600= 0.04）共培养的3张滤纸（直径9cm）蘸有5.5毫升N6orDKN液体共培养培养基中添加2,4 - 二（2毫克/升），脯氨酸（10mM）的酪蛋白 e 水解产物（300毫克/升），蔗糖（30克/ L），葡萄糖（5克/升），-半胱氨酸（100mg / L时）和乙酰丁香酮 农杆菌介导的转化 液体介质 L （15毫克/升）在258℃于黑暗中3天。同的愈伤组织共转化效率进行比较（15毫克/升）在258℃于黑暗中3天。同的愈伤组织共转化效率进行比较 cultivatedon固体介质，转换效率提高了约5倍，通过使用过滤器 纸的方法很多品种的大米，包括那些以前产生了许多穷人 转化率。 2009爱思唯尔爱尔兰有限公司保留所有权利。 1介绍 在1968年第一次报道使用再生组织培养的水稻[1?4]，而这种植物物种现在被广泛使用转基因实验。 DNA通过电穿孔，原生质体转化，根癌农杆菌介导的转化转移到水稻植株 [5-7]。最近，已通过几种方法，提高农杆菌介导的水稻转化效率，以产生一个IUM-介导转化所需的T-DNA的转化子，插入和FOX库以及基因打靶技术的研究[8,9]。它已被认为具有高度发展的高效，大规模改造系统，以处理更多超过103个转化，将是一个基因目标成功实现的前提条件[9]。 日本的水稻品种Nipponbare已被广泛用于转基因实验，由于其良好的再生能力，从愈伤组织中高效率的介导根癌农杆菌转变。以标准的水稻转化方式，用于产生大量的转化，但是，只有有限的几个品种，这表明实验水稻转化的参数没有经过充分的优化. 经常使用细菌分离出抗生素耐药性和抗除草剂基因，选择转化的植物组织，由于在高效率选择转基因细胞。新霉素磷酸转移酶，潮霉素磷酸转移酶和草丁膦从细菌中分离出的乙酰基转移酶经常用于选择转化植物组织[10,11]。他们的可能存在于粮食作物，但是，这引得全球公众关注。在这些公众关注的问题中，使用分离自细菌的抗生素或除草剂抗性的标记物的转基因生物（GMOs）可以避免的。一些新的系统，利用原生植物基因在最近几年得到实验。这些包括邻基苯甲酸合成酶α-亚基基因正选择系统，如苄基腺嘌呤N-3-葡糖苷酸，甘露糖和亚硝酸盐还原酶基因[10?17]。然而，使用这些的阳性筛选系统选择转化细胞，相比使用的抗生素抗性基因效率较低。这是一个高效多产的转基因植物在实际应用中的障碍。为了优化根癌农杆菌介导的水稻转化的效率，许多研究人员已经尝试了不同的媒介和不同条件的接种，介导培养农杆菌。一些研究人员报告说，在根据通过使用了含还原剂如抗坏血酸或L-半胱氨酸共培养介质，组织坏死（褐变）被减少，转化的频率增加。 [18?20]。褐变被认为是农杆菌过量增殖引起的，从而降低了频率的转变。因此，如果扩散细菌可以被控制，以最大限度地提高细菌感染和T-DNA整合到植物基因组，并尽量减少组织坏死，它应该有可能显著增加转化期间共培养频率。 2.0 材料与方法 2.1 水稻转化过程 从遗传资源中心获得的水稻种子，，日本国立农业生物科学研究所。农杆菌两种文化的基础上对水稻的转化条件[8,16]。成熟的种子的日本晴，Siryo308北海，Dular和越光10％次氯酸钠溶液中灭菌为30分钟，然后留在1％的过氧化氢溶液3小时。他们再次进行灭菌20分钟，在10％的次氯酸钠。三个用无菌水冲洗后，他们被安置在坚实的N6介质[21]，补充了2,4-D（2毫克/升），脯氨酸（10毫摩尔），酪蛋白水解物（300毫克/升），蔗糖（30克/升），和介尔雷特（3克/升）N6D介质）。种子越光被转移到DKN介质[22]含2,4-D（2毫克/升），脯氨酸（10毫摩尔）的补充，酪蛋白水解物（300毫克/升），蔗糖（30克/升），和介尔雷特（3克/升）（DKND介质），1周后上N6媒体文化。培养物在28使用16小时光照（50毫摩尔米2秒1）和图8C8小时黑暗周期