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Supporting Information of “基于便携拉曼光谱仪和双层纸芯片的头发皮质醇超高灵敏检测” 1. 仪器与试剂 仪器：彩色喷蜡打印机（Phaser 8560 DN，日本富士施乐公司），便携式拉曼光谱仪（Sunshine TG-Raman，长春新产业光电技术有限公司），滤纸（Whatman NO.1 层析纸），DZF-6030A 真 空烘箱（上海一恒），移 液 枪（ Corning），超纯水系统（g 18MΩ，Milli-Q），电子天平，摇床， 旋转震荡仪，加热套，冷凝管，三口烧瓶，封口膜。 试剂：皮质醇（大连美仑生物技术有限公司 Dalian Meilun Biotech Co.,Ltd），氯金酸（沈阳金 科试剂有限公司），柠檬酸钠（SC）（西格玛），十二烷基磺酸钠，盐酸，氢氧化钠。 皮质醇抗原抗体基准液的配制： 皮质醇抗原：原液 1 mg/mL，500μL.用 pH 7.4 的 PBS 缓冲液稀释至 10μg/mL。 皮质醇抗体：原液 0.75 mg/mL，不经稀释，直接使用。 2. 样品制备 取 100 mg 毛发，用异丙醇洗涤干净，将其剪碎后，采用 10mL 甲醇在 50℃条件下孵育 16h， 液质联用检测证明其中不含有皮质醇，所以可以将其作为检测的背景基质，考察头发中其他 物质是否会对检测造成干扰，所以我们接下来的实验中向其中加入不同量的标准品构建出不 同浓度的实际样品进行检测。 3. 表面增强纳米粒子的合成 （1）圆底烧瓶使用前需要用王水（浓盐酸：浓硝酸=3:1）浸泡 1h 左右，然后用自来水彻底 冲洗 3-5 遍，再用三次水超声 3 次，每次 15 分钟，然后加入 50mL 的超纯水，再加入 0.605 mL 1%的 HAuCl4 溶液（1g 溶于 100 mL 水中）。 （2）配制 1%的 Na3C6H5O7·2 H2O，（每次称取 0.0456 g，溶解于 4mL 超纯水中，现用现配）。 组装仪器并加热，达到 100℃并剧烈回流时一次性快速加入 0.605 mL 柠檬酸三钠，反应约 40 min(让粒子逐渐形成球形)。装置图如图 3.1。 （3）整个反应过程中的颜色变化：加入氯金酸时呈淡黄色，煮沸时淡黄色加入柠檬酸三钠， 先是透明后变黑色然后变蓝紫色，反应一会儿呈棕色。最后呈紫红色，反应结束后，自然冷 却到室温，合成完毕。 图 S1 合成 55 nm 金粒子所需装置图 4. 皮质醇单抗溶液（4-mercaptobenzoic acid-金纳米粒子-单抗）的制备 纳米粒子的修饰过程如下，首先在金纳米粒子上连接拉曼信号分子 MBA，然后再在 MBA 上连接皮质醇抗体。具体操作如下： （1）取配制好的 55nm 金溶胶 1mL，离心之后去掉上清液，加入 1mL 硼砂缓冲液和 2.5μL MBA，震荡 1.5h，5000r 离心 15 min，去除上清液后加入 1mL 硼砂溶液，混悬使其均匀， 此时得到的是 Au-MBA。 （2）在上一步骤中得到的溶液中加入 2.8μL 皮质醇抗体，在摇床上震荡 3-4 h，5000 r 离心 15min，去除上清液，后加入 1 mL 硼砂缓冲液。 （3）继续加入 10μL 10%的 BSA 溶液，摇床上摇动 1h，5000 r 离心 15 min 后，去除上清液， 加入 1 mL 硼砂溶液待用。此时金标抗体就制备完成了。 5. 纸质微流控芯片的设计与制作 将设计好的芯片图案用喷蜡打印机打印在