噬菌体展示技术原理其应用.pptVIP

Phage display Liu Yun; 噬菌体展示技术（Phage Display techniques，PDT）起源于1985年，是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术，广泛应用于蛋白组学、基因克隆等多个分子生物学领域。;Smith GP. Filamentous fusion phage : novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface. Science, 1985, 228: 1315 - 1317.; 噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。 ;特 点;Phages;Filamentous phages;(a) Adenovirus. (b) Rotavirus. (c) Influenza virus (courtesy of George Leser). (d) Vesicular stomatitis virus. (e) Tobacco mosaic virus. (f) Alfalfa mosaic virus. (g) T4 bacteriophage. (h) M13 bacteriophage.;M13噬菌体的生活史;丝状噬菌体的基因及蛋白结构;载体的插入位点 ;pIII 和pVIII 噬菌体展示系统;Used for cloning foreign genes among other applications Proteins and peptides are fused to the Capsid (surface) of the phage The combination of the phage and peptide is known as a Fusion Protein;选择方法： 淘选（Panning) 而不是 筛选（Screening) ;非展示系统 展示系统; ;T7噬菌体展示筛选系统;Solid phase selection with immunotubes ;Bind to Streptavidin;Wash to remove unbound phage particles;Elute bound phage;Amplify eluted phage Repeat selection Analyze a) ELISA b) Specificity c) Sequencing d) Affinity e) Activity ;举 例;;;;;;;噬菌体展示系统的应用及优缺点;; 优点： 　　A. 高通量的淘选：将靶标分子（抗体）固定在固相载体上，加入噬菌体展示肽库（噬菌体的数量可达1011 PFU），利用抗原-抗体的特异性亲和力将与抗体结合的噬菌体吸附在固相载体上，反复数轮扩增、淘选，即可将有用的基因从多达百万以上的噬菌体克隆中分离出来。 B. 高效率：在极低的存在水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能。　　C. 可用于模拟表位的筛选：利用噬菌体展示技术得到模拟表位，同???可诱发与天然表位相似的特异性免疫反应。 D.展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接:使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。 　　E. 易于纯化 重组噬菌体的纯化步骤简单、不要求昂贵的试剂与设备，在一般的实验室条件下就可以完成。 ; 缺点： 　　 首先，目前所建的肽库容量有限，要想构建大片段的肽库很困难。 其次，需要解决肽库的多样性问题。 第三，少数多肽由于疏水性过强，或由于影响外膜蛋白的折叠而不能展示在噬菌体表面。 ;谢 谢！