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经典蛋白含量测定方法比较双缩脲法实验步骤简介

实验四、双缩脲法测定蛋白质的浓度; 相关知识;方 法;一、实验目的; ;双缩脲反应:碱性环境 ;蛋白质含有两个以上的肽键,因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关,因此被广泛地应用。 在一定的实验条件下, 未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应, 并于540-560nm下比色, 可通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。 除-CONH-有此反应外,-CONH2, -CH2-NH2,-CS-NH2等亦有此反应。;三、实验仪器、材料和试剂 ;四、实验操作步骤;(二)? 绘制标准曲线 以每管蛋白的含量为横坐标,其相对应的A520为纵坐标绘制标准曲线。 (三)未知样品蛋白质浓度的测定 取2只试管,每只分别加入1ml稀释的未知样品,再分别加入4ml双缩脲试剂,操作方法同前。 然后,测540nm处光密度值,取其平均值。从绘制的标准曲线查得未知样品的蛋白浓度。 ;五、实验结果

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