Q_PCRArray服务介绍.docVIP

Q-PCR array是信号通路基础生物学研究和临床疾病研究的重要工具。这种功能分类芯片运用成熟的SYBR Green荧光定量PCR技术，专注于一个信号通路中基因的表达水平检测。与传统的高密度表达谱芯片相比，Q-PCR array具有针对性强、灵敏度高、准确可靠等优点。?芯片上的基因包括了与研究对象有确定关系的基因，或至少是与研究对象的关系有待考证的基因。如果研究对象是某一生物学通路的基因，则使用针对该类基因的功能分类基因芯片比使用高密度表搭配芯片更加有效便利。 ????????美国SABioscience公司是Qiagen旗下子公司，在Q-PCR array领域具有国际领先地位。目前SABioscience公司针对不同的信号通路和疾病相关基因设计了150多款功能分类芯片，种属包括人、小鼠、大鼠、果蝇、猪、兔、鸡等，格式分为96孔和4 x 96孔两种。针对客户的需求，还有个性化定制芯片服务。BioTNT是SABioscience公司的合作伙伴，能为您提供完善的功能分类基因芯片技术服务，您只需提供保存完好的组织或细胞样品，我们就可为您完成实验操作和数据分析。 ?????? ???? BioTNT 同时提供 HYPERLINK /product/PCR-Array.aspx?trandid=77tm自产QPCR Array 产品，并提供定制QPCR Array 产品。 ? BioTNT QPCR芯片特点: l?? 灵敏度高，样本使用量低； l?? 线性范围广，可同时检测表达水平差异大的基因； l?? 每个基因的检测引物优化后保证高扩增率和产物单一； l?? 重复性高，Ct值的平均差异只有0.25个循环； ? BioTNT QPCR Array芯片技术服务流程： 1、选择您要检测的基因； ????????或者联系Biotnt提供基因名称(发送到 HYPERLINK mailto:sales@ sales@?)； 2、确定是采用目录QPCR Array还是定制QPCR Array； ???????确定PCR Array 产品号，确定样本数量，确定是做单孔还是重复；与BioTNT 签订产品合同和服务合同，付定金；? 3、客户提供样本； ?4、BioTNT 对客户提供的样本进行干冰取样，RNA 抽提 ?5、客户样本RNA抽提： ??a) 若实验对象为组织样本，取适量（50-100mg）新鲜组织或正确保存的样本，加1mL的Trizol，匀浆后抽提RNA，采用Qiagen RNeasy Mini Kit (50) 74104，RNase-Free DNase Set (50)，79254进行抽提RNA，在抽提的过程中加入DNase，去除基因组DNA。 b)若实验对象为细胞样本，每份样本取1*106-107细胞，完全吸去培养液后加 1mL的Trizol，裂解后提取RNA，采用Qiagen RNeasy Mini Kit (50) 74104，RNase-Free DNase Set (50)，79254进行抽提RNA，在抽提的过程中加入DNase，去除基因组DNA。 6、RNA质量检测? a) 采用NanoDrop测定RNA浓度，OD比值（260nm和280nm处的OD值），并评测RNA质量。 质量符合要求的可进行下一步实验； RNA质量如需进一步评估，可以采用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析（选测）。 不符合要求的需要重新提供样品送检； 7、cDNA模板制备? 均一化RNA 浓度，按照cDNA第一链合成试剂盒将样本RNA逆转录为cDNA。 8、实时定量PCR? ?实验前先采用CDNA 选测内参基因进行第二次质检；质检合格的进行正式QPCR Array 实验； ?根据说明将cDNA模板适当稀释后加入到实时定量PCR反应混合液中，然后QPCR Array板上（预包被了特异性引物）加入等量反应液，采用ABI ViiA7进行实时定量PCR反应。 9、数据处理： ?利用仪器配套软件计算PCR芯片中的每个基因的Ct值。 按照BioTNT QPCR Array 分析软件，分别copy test sample和control sample 的CT值到excel 表中。 根据excel 表软件，计算是否符合质量控制，选择内参基因，计算基因的表达上调或者下调，筛选出有价值的基因。 ? 10、提供实验报告： ? 包括详细的实验方法及实时定量PCR芯片实验结果及相关图表。 具体包括： 包括原始数据CT 值；原始数据文件； 包括实验结果；3D-Profile 图表；scatter plot 图表；volcano plot图表； ? ? BioTNT 实时定量PCR? 检测使用的仪器 ? 进行检