GB 4789.3-2010食品安全国家标准　食品微生物学检验　大肠菌群计数.pdf

中华人民共和国国家标准 GB 4789.3—2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数 National food safety standard Food microbiological examination: Enumeration of coliforms 中华人民共和国卫生部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 食品伙伴网 GB 4789.3—2010 I 前 言 本标准代替GB/T 4789.3-2008《食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数》。 本标准与GB/T 4789.3-2008相比，主要修改如下： ——修改了标准的中英文名称； ——“第二法 大肠菌群平板计数法”的平板菌落数的选择范围修改为“15 CFU～150 CFU”； ——删除了“第三法 大肠菌群PetrifilmTM 测试片法”。 本标准的附录A、附录B为规范性附录。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——GB 4789.3-1984、GB 4789.3-1994、GB /T 4789.3-2003、GB /T 4789.3-2008。 食品伙伴网 GB 4789.3—2010 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数 1 范围 本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。 本标准适用于食品中大肠菌群的计数。 2 术语和定义 2.1 大肠菌群 coliforms 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 2.2 最可能数 most probable number，MPN 基于泊松分布的一种间接计数方法。 3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。 3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒温水浴箱：46 ±1 ℃ ℃。 3.4 天平：感量 0.1 g。 3.5 均质器。 3.6 振荡器。 3.7 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量 500 mL。 3.9 无菌培养皿：直径 90 mm。 3.10 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 3.11 菌落计数器。 4 培养基和试剂 4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录 A 中 A.1。 食品伙伴网 GB 4789.3—2010 2 4.2 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录 A 中 A.2。 4.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：见附录 A 中 A.3。 4.4 磷酸盐缓冲液：见附录 A 中 A.4。 4.5 无菌生理盐水：见附录 A 中 A.5。 4.6 无菌 1 mol/L NaOH：见附录 A 中 A.6。 4.7 无菌 1 mol/L HCl：见附录 A 中 A.7。 食品伙伴网 GB 4789.3—2010 3 第一法 大肠菌群 MPN 计数法 5 检验程序 大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。 图1 大肠菌群 MPN 计数法检验程序 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g 样品,放入盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min,或放入盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋 中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶 （瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 6.1.3 样品匀液的 pH 值应在 6.5～7.5 之间，必要时分别用 1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl 调节。 36℃±1℃ 48h±2h 36℃±1℃ 48 h±2 h 检 样 25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质 10 倍系列稀释 选择适宜 3 个连续稀释度的样品匀液，接种 LST 肉汤管 产 气 不产气 BGLB 肉汤 不产气 产 气 大肠菌群阳性