GB 4789.30-2010食品安全国家标准　食品微生物学检验　单核细胞增生李斯特氏菌检验.pdf

中华人民共和国国家标准 GB 4789.30—2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验 National food safety standard Food microbiological examination: Listeria monocytogenes 中华人民共和国卫生部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 GB 4789.30—2010 I 前 言 本标准代替 GB/T 4789.30-2008《食品卫生微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》。 本标准与 GB/T 4789.30-2008 相比，主要变化如下： ——修改了标准的中英文名称； ——删除“第二法 全自动酶链荧光免疫分析仪筛选法”； ——删除“第三法 全自动病原菌检测系统筛选法”。 本标准的附录 A 为规范性附录。 本标准所代替标准的历年版本发布情况为： ——GB 4789.30-1994、GB/T 4789.30-2003、GB/T 4789.30-2008。 GB 4789.30—2010 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验 1 范围 本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的检验方法。 本标准适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。 2.2 恒温培养箱：30 ℃±1 ℃、36 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 显微镜：10×～100×。 2.5 电子天平：感量 0.1 g 。 2.6 锥形瓶：100 mL、500 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）。 2.8 无菌平皿：直径 90 mm。 2.9 无菌试管：16 mm×160 mm.。 2.10 离心管：30 mm×100 mm。 2.11 无菌注射器：1 mL。 2.12 金黄色葡萄球菌（ATCC25923）。 2.13 马红球菌（Rhodococcus equi）。 2.14 小白鼠：16 g～18 g。 2.15 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 含 0.6 %酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE）：见附录 A 中 A.1。 3.2 含 0.6 %酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）：见附录 A 中 A.2。 3.3 李氏增菌肉汤 LB（LB1，LB2）：见附录 A 中 A.3。 GB 4789.30—2010 2 3.4 1 %盐酸吖啶黄（acriflavine HCl）溶液：见附录 A 中 A.3.2.1。 3.5 1 %萘啶酮酸钠盐（naladixic acid）溶液：见附录 A 中 A.3.2.1。 3.6 PALCAM 琼脂：见附录 A 中 A.4。 3.7 革兰氏染液：见附录 A 中 A.5。 3.8 SIM 动力培养基：见附录 A 中 A.6。 3.9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红（MR）和 V-P 试验用]：见附录 A 中 A.7。 3.10 5 %～8 %羊血琼脂：见附录 A 中 A.8。 3.11 糖发酵管：见附录 A 中 A.9。 3.12 过氧化氢酶试验：见附录 A 中 A.10。 3.13 李斯特氏菌显色培养基。 3.14 生化鉴定试剂盒。 GB 4789.30—2010 3 4. 检验程序 单核细胞增生李斯特氏菌检验程序见图 1。 图 1 单核细胞增生李斯特氏菌检验程序 5 操作步骤 5.1 增菌 以无菌操作取样品 25 g（mL）加入到含有 225 mL LB1 增菌液的均质袋中，在拍击式均质器上连续 均质 1 min～2 min；或放入盛有 225 mL LB1 增菌液的均质杯中，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min。于 30 ℃±1 ℃培养 24 h，移取 0.1 mL，转种于 10 mL LB2 增菌液内，于 30 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 5.2 分离 取 LB2 二次增菌液划线接种于 PALCAM 琼脂平板和李斯特氏菌显色培养基上，于 36 ℃±1 ℃培养 24 h～48 h，观察各个平板上生长的菌落。典型菌落在 PALCAM 琼脂平板上为小的