微生物实验室培养[课件].ppt

专题2 :微生物的培养与应用; 了解有关微生物及培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。;微生物;2.病 毒;病毒的增殖;;细菌的构造;;　　芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。 　　芽孢又小又轻，可以随风飘散。 　　当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。;;菌　落;细菌的菌落特征因种而异 ;?4.放线菌;（2）繁殖;链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素 ;?5.真菌;;生 殖;一、基础知识：; 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。;液体培养基：;半固体培养基：;培养基的种类;选择培养基; 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 ; 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;;?2.营养;4、微生物的五种营养要素; 凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质都称为碳源 。; C素构成细胞及代谢产物的骨架 C素是大多数微生物代谢所需的能量来源 自养微生物以二氧化碳或碳酸盐为惟一碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。 碳源是异养微生物的主要能源物质。 ;无机C源：CO2、碳酸盐，只能被自养微生物利用 有机C源：各种糖类，其次是有机酸、醇类、 脂类和烃类化合物 ; 凡是能为微生物提供所需氮元素的营养物质都称为氮源。; 为微生物提供合成细胞物质代谢产物的原料 对许多微生物来说，既可利用无机态氮，也可利用有机态氮。? 固氮微生物可以利用氮气作为氮源进行生长。 某些种类的氮源也能为微生物提供能量，如NH3既是硝化细菌的氮源又是能源，含C、H、O、N的蛋白质等也能为微生物提供能量。;分子态氮：固氮微生物以分子氮为唯一氮源 无机态氮：硝酸盐、铵盐几乎所有微生物能利用 有机态氮：蛋白质及其降解产物 a实验室常用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏做氮源 b生产用玉米浆、豆饼、葵花饼、花生饼等; 构成微生物细胞的组成成分 调解微生物细胞的渗透压， PH值和氧化还原电 位 有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生物的能源 构成酶活性基的组成成分，维持酶活性。Mg、Ca、K是多种酶的激活剂 ; 构成微生物细胞以C、H、O、N、P、S六种元素为主，约占细胞干重的95％以上； Ca、K 、Mg、Fe为大量元素，以无机盐阳离子形式被吸收，配培养基要加磷酸盐、硫酸盐。 Zn、Ca、Mn、Co、Mo等微量元素，在微生物培养中有0.1PPM就可以了，自来水原料中已够用，不需另加。 ;; 有的微生物自己不能合成维生素，需要外加，主要是B族维生素、硫胺素、叶酸、泛酸、核黄素等，如生产味精需加生物素（是B族中的一种即VH）。 ; 有些微生物自己不能合成某种氨基酸，必须给予补充，如赖AA发酵所用的黄色短杆菌不能合成环丝AA，为环丝AA缺陷型菌株，在培养基中必须添加含环丝AA的氮源。如豆饼水解液或毛发水解液等。 ; 嘧啶和嘌呤是核酸和辅酶的重要组分，是许多微生物必须的生长因素。 有些微生物不仅不能合成嘧啶和嘌呤，而且不能将补充的嘧啶和嘌呤结合在核苷酸上，还必须供给核苷酸，有的菌需补充卟啉或其衍生物，还有的菌需供给（低碳）脂肪酸等。;水;1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成;碳源、氮源、生长因子的比较;3、培养基配制原则：;（二）无菌技术;　（１）消毒定义：;比较项;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……;1、灼烧灭菌 接种环、接种针、试管口 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.; 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以