γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化.pdfVIP

????正 ? ?月? 首 都 医 科 大 学 学 报? ???．????? 第 ??卷? 第 ?期? ?????????????????????????????????????? ??????? ??．?? ????：??．????／?．????．?????????．????．??．????? · 基 础 研 究 ·? 一 突触核蛋 白的克隆 、表达及纯化? 刘晓娟?△? 张力青? 李 健? 翟方丽? 李慎 涛?，? ??．首都 医科 大学基 础医学院生物化学与分子生物学系 ；?．首都医科大学基础医学院免疫学系 ；? ?．清华 大学第 一附属医院华 信医院检验科 ?? 【摘要】? 目的 对 ??一突触核蛋白???????????基因进行克隆，并对其表达及纯化条件进行优化。方法 根据 ???????中? 突触? 核 蛋 白的基 因序列 ，设计 ???引物 ，从人脑 ????文库中扩增 ??一突触核 蛋白的编码 ???序列 ，将其克 隆至 ???????一?载体 中，构? 建 重组质粒 ，将测序正确 的重组质粒转化人大肠杆菌 ?????????中 ，用 ????诱 导表达 ；对培养温度 、????的用量 、诱 导时间等条? 件 进行 了优化 ；用 ???—????和质谱分析表 达的 目标蛋 白；用亲和层 析 、离 子交换层 析 、凝 胶过滤 纯化 目标蛋 白。结 果? 一突触? 核蛋 白在大肠杆菌 中高效 、可溶性 表达 ，经 质谱鉴定 及 ???—????分析 ，表达 产物为 ??．突 触核蛋 白。经 过纯化 ，得 到 纯度高 达? ??％的?一突触核蛋 白。结论 成功地在大肠杆菌 中高效表达 了 ??一突触 核蛋 白，并建? 了纯化工 艺 ，得 到高纯 度的重组 蛋 白，为? 进一步研究?一突触核蛋 白的晶体结构 、生物学活性及功能 ，探讨其在肿瘤 中的发病机制奠定 了基础 。? 【关键词】? 一突触核蛋白；融合蛋白；原核表达；蛋白纯化? 【中图分 类号】 ????? ???????，????????????????????????????????? ??????????????????? ????????—????? ，????????—????? ，????????，?????????—???，???????—????’? ??．????????????????????????????????????????????????，???????????????????????????????，??????????????????????????；?