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高效液相色谱;;二、高效液相色谱仪器;;(l)紫外检测器
灵敏度高;
线形范围高;
对流动相的流速和温度变化不敏感;
波长可选,易于操作;
可用于梯度洗脱。 ;(3)示差折光率检测器;(4)荧光检测器;(5)蒸发光散射检测器;1、固定相:
吸附色谱所用固定相多是一些吸附活性强弱不等的吸附剂,如硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶的优点较多,如线性容量较高,机械性能好,不溶胀,与大多数试样不发生化学反应等,因此,以硅胶用得最多。; 2、流动相:
一般把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中:
对极性大的试样往往采用极性强的洗脱剂;
对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂;
洗脱剂的极性强弱可用溶剂强度参数(ε0)来衡量。ε0越大,表示洗脱剂的极性越强。下表列出一些常用溶剂在氧化铝吸附剂中的ε0值。在硅胶吸附剂中ε0值的???序相同,数值可换算(ε0硅胶=0·77×ε0氧化铝)。 ;; 3. 对流动相溶剂的要求:
(1)溶剂对于待测样品,必须具有合适的极性和良好的选择性。
(2)溶剂要与检测器匹配,当使用紫外检测器时,流动相不应有紫外吸收。
(3)高纯度。由于HPLC灵敏度高,对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳,或产生“伪峰”。
(4)化学稳定性好。勿选与样品发生反应或聚合的溶剂。
(5)低粘度。若使用高粘度溶剂,势必增高压力,不利于分离。但粘度过于低的溶剂也不宜采用,例戊烷、乙醚等,它们易在色谱柱或检测器内形成气泡,影响分离。
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