第9章配子与胚胎生物工程技术.ppt

第九章 配子与胚胎生物工程技术;配子与胚胎生物工程概述 胚胎移植技术 其他胚胎工程技术概述;配子与胚胎生物工程也称胚胎生物技术或胚胎工程技术，主要是对动物的卵子、精子和胚胎在体外条件下进行各种操作，以加速繁育经济动物，培育优良品种，或挽救濒危动物使用的一系列工程技术方法。;研究内容;胚胎移植;一、胚胎移植技术概述;牛胚胎移植技术路线示意图;着床前早期胚胎的游离状态； 不同个体（物种）早期胚胎发育内环境相似； 不会发生免疫排斥;二、 胚胎移植的意义;三、国内外发展概况;1890年 英国第一次兔获得胚胎移植成功 1934年 绵羊 1949年 山羊 1951年 猪 1951年 牛 1970年 马 1975年1月 美国丹佛召开第一届国际胚胎移植学会 1980年代 欧洲使用MOET 奶牛育种;国际间胚胎贸易非常活跃，早在1994年，全世界仅胚胎移植牛就已超过350,000头，其中进出口的胚胎约占总数的10%。 近年来，国际上胚胎的产量和贸易量则成倍增长。; 2.发展前景; 四、胚胎移植的基本原则;供体和受体在种属上必须一致； 供体和受体在生理上必须一致：供、受体在发情时间上应同期化，一般相差不超过24h，否则移植成功率显著下降； 从供体中收集胚胎的部位与给受体移植胚胎的部位必须一致：即从供体子宫角内收集到的胚胎应该移植到受体的子宫角内。;胚胎收集与移植的时间不能超过周期黄体的寿命，因此，胚胎的收集时间不能超过发情配种后第7天，最好是在发情配种后的第5-7天内进行。;胚胎的收集及移植过程应当严格按照要求进行，尽量不使其受到物理、化学或生物方面的影响。 同时，胚胎移植前需进行鉴定，确定其发育正常者才能进行移植。; 五、胚胎移植操作步骤;1.供、受体的选择;供体应是良种，而且为性状表现优秀、具有较高育种价值与遗传优势的个体； 供体应健康无病，膘情中等偏上，年龄以青壮年为佳； 供体生殖机能应处在较高水平。既无难产、流产等繁殖病史，也无子宫卵巢疾病，超排处理前应有两个或两个以上的正常情期。;;一般选用价格低廉、生产性能比较低的同种母畜，达到配种年龄和体型； 要具有良好的健康状态，体型与膘情中上等，初产或经产青壮年母畜。检疫和疫苗接种与供体相同； 应具有良好的繁殖性能，既无难产、流产等繁殖病史，也无子宫卵巢疾病，移植胚胎前应有两个或两个以上的正常情期，也不能与公畜同群。;2.1 超排定义 在母畜（供体）发情周期的某一时期，用外源性的促性腺激素处理，从而促使其卵巢上较正常有更多个卵泡同时发育，并且能够同时或准同时排出多个具有受精能力的卵子，这一技术称为超数排卵，筒称“超排”。;牛有PG+FSH法和CIDA+FSH法两种； 发情后9－13天开始； 常用的激素为FSH；注射方法一般是连续4d递减注射,每天2次,间隔12小时（半衰期短）； 发情后8－12小时配种，间隔12小时再配种一次。; 在发情周期第10、11、12、13天每头牛分别肌注FSH 160、140、110、90 单位（共500IU)，每天分两次注射，在第12天注射FSH的同时肌注PG，上午2支/头，下午1支/头。 发情后供体AI或配种2-3次。; ;缩短黄体期的前列腺素法(PG法) 延长黄体期的孕酮法 ; PGF2α有溶解黄体的作用，从而引起发情，所以只对卵巢上存在黄体的受体有效。 在情期第9天以后，注射PGF2α，常可在注射后2-3天内发情。 对于不能确定发情周期的受体，可采用间隔10-12天的两次注射法。 此方法方便可靠，但费用较高。;;孕酮能够抑制腺垂体释放FSH，每日肌注或口服孕酮，或经阴道海绵栓给予孕酮或其类似物，一般处理12-18天后，可以抑制卵泡发育。停止处理或撤除海绵栓后，孕酮的抑制作用消失，卵巢上即有卵泡发育，通常在2-3天内发情。 为了提高排卵的效率，在孕激素处理结束的前一天，可以给予小剂量的FSH。 此法费用低，但处理时间长。;;4.1 冲胚液和保存液的制作 冲胚液有很多种，目前最常用的为含5%犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBS），也可用于体外短期保存胚胎。 保存时间长或体外培养多用M-199液。; 4.2 回收过程 牛适宜于5-7日龄胚胎; 现均采用二通管非手术采卵法：用直肠把握子宫颈法插入带有探针的二通管直至一侧子宫角的基部，通过打气孔注入8--10ml空气,抽出探针，通过中心管道反复注入--回收冲卵液,连续5--6次。同样方法冲另一侧子宫角。;子宫角回收的液体较多，可以通过专用胚胎漏斗除去多余的冲卵液，在连续变倍解剖显微镜（实体显微镜）下进行检胚； 胚胎的质量评定：主要采用形态学方法，优质胚胎才能用于进行胚胎冷冻或移植。;A级;形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀