河豚毒素停搏液对心肌粘合连接的影响的论文.docVIP

　　河豚毒素停搏液对心肌粘合连接的影响的论文 【摘要】 目的: 研究 na+通道阻滞剂河豚毒素(ttx)停搏液对离体大鼠心肌粘合连接的 影响 . 方法 : as2)组，建立离体心脏langendorff和neely灌注模型，待搏动稳定，灌注30 min后停搏60 min，再灌注60 min，观察各组心脏停搏前后心率（hr）、冠状动脉流量(caf)、左心室收缩末期压力(lvesp)以及压力变化速率(±dp/dt)的恢复率. 采用免疫组化和yocardial ischemia/reperfusion injury， miri）显示出一定的优势，有关的研究主要集中在对细胞器等方面，而对细胞粘合连接的研究还少见报道. 本实验旨在观察以ttx阻断na+通道为特点的心脏停搏液在miri中对粘合连接的影响，同时监测心功能的变化，以探讨其可能的机制. 　　1材料和方法 　　1.1材料成年l870b2 langendorff离体心脏灌流系统（澳大利亚adinstruments公司）. krebshenseleit液（kh 液) (mmol/l) 成分：nacl 119，nahco3 25，kcl 4.75，mgso4 1.2，kh2po4 1.18，cacl2 1.4，glucose 11，42.41(mol/l) o2+2.23(mol/l) co2混合气持续氧合，维持ph 7.8（自行配制）；ttx心脏停搏液：质量浓度为20 μmol/l的ttx加入kh液中；sth2心脏停搏液成分(mmol/l)：nacl 110.0，kcl 16.0，mgcl2 16.0，cacl2 2.0，glucose 11.0,维持ph 7.8（自行配制）. 　　1.2方法 　　1.2.1实验分组将20只大鼠随机分为ttx组和sth2（st. thomas2)组，每组大鼠10只. ttx组采用ttx心脏停搏液停搏；sth2组采用sth2心脏停搏液停搏. 　　1.2.2实验模型的建立大鼠腹腔注射肝素盐水200 iu，20 min后脱颈处死，迅速取出心脏，建立离体鼠心langendorff和neely灌注模型. 用37℃, 42.41(mol/l) o2+2.23(mol/l) co2混合气持续氧合的kh液经主动脉根部逆行灌注，压力60 mmhg(1 mmhg=0.133 kpa)，稳定15 min. 左心房插管，左心室置入测压管，灌注液转流，转为工作心脏灌注模型，灌注压15 mmhg，后负荷52～60 mmhg，稳定5 min，测定心率（heart rate，hr）、冠状动脉流量（coronary artery floaximal rise in left ventricular pressure/maximal fall in left ventricular pressure，±dp/dt. 工作15 min后，主动脉根部按2 ml/100 g质量注入4℃心脏停搏液使心脏停搏，并观察心脏停搏时间. 停搏30 min后再经主动脉根部按2 ml/100 g质量注入心脏停搏液停搏，停搏过程中同时给予4℃盐水纱布冷敷. 停搏60 min后给予37℃, 42.41(mol/l) o2+2.23(mol/l) co2混合气持续氧合的kh液经主动脉根部逆行复灌，观察心脏复搏时间. 15 min后转为工作心脏灌注模型，共复灌60 min，并在工作心灌注稳定后40 min测定血流动力学参数，血流动力学参数的恢复率用复搏后的参数除以停跳前的相应参数. 20 min后停止实验，取部分左心室肌50 mg，-80℃保存，用于心肌ncadherin和αactin的检测. 　　1.2.3心肌ncadherin和αactin的免疫组化检测取3 mm×3 mm×3 mm大小心肌组织行石蜡切片，sabc法行免疫组化染色，光学显微镜观察心肌ncadherin和αactin的分布情况并采集图像，采用imagepro plus 6.0图像 分析 系统进行半定量检测，用平均吸光度a值表示ncadherin和αactin的相对含量. 　　1.2.4心肌αactin的g心肌组织，提取总蛋白，bca法定量，蛋白电泳分离、转膜、抗原抗体反应及ecl显色，采用quantity one图像分析系统采集图像并行半定量分析. 　　统计学处理：采用spss12.0软件进行统计学 分析 . 血流动力学参数测定采用多功能生理记录仪(adinstruments/8sp， australia)，chart 4图形、数据处理软件进行信号采集和统计. 数据以x±s表示，组间比较用两独立样本的t检验. 　　2结果 　　2.1停搏时间和复搏时间