3第三章临床生物化学检验常用技术廖国玲1选读.ppt

临床生物化学检验常用技术;本章主要内容 第一节 光谱分析技术 第二节 电化学分析技术 第三节 干化学分析技术 第四节 电泳分析技术 第五节 基因扩增技术 ;教学目标和要求;第一节 光谱分析技术;一、光谱分析技术的基本原理：;（一）分光光度技术的基本原理;完全吸收;朗伯-比尔定律： I0：入射光强度 C:溶液浓度 b:液层厚度 I:透射光强度 T:透光度 A:吸光度 k:吸光系数; Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层 厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。 其表达式为： ; 当溶液浓度C的单位为g/L，溶液液层厚度L的单位为cm时，K叫“吸光系数”，用а表示。其单位为L/g·cm 当溶液浓度C的单位为mol/L，溶液液层厚度L的单位为cm时，K叫“摩尔吸光系数”，用ε（êpsilon）表示。 其单位为L/mol·cm，此时： A= εLC ε的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。 ; ε是物质的特征性常数。 摩尔吸光系数越大，表示物质对波长为λ的光的吸收能力越强，同时在分光光度法中测定的灵敏度也越大。 ;吸收定律的适用条件： ①必须是使用单色光为入射光； ②溶液为稀溶液；;（二）原子吸收分光光度法（Atomic Absorption Spectrometry, AAS） 基本原理：根据待测元素的气态原子，能吸收同种原子所发射的特征光辐射，吸收特征符合Lambert-beer定律，即一定条件下，原子的吸光度同待测元素基态原子的浓度成正比，计算出试样中待测元素的含量，这种方法称为原子吸收光谱法。;四大部分组成：光源、单色器、原子化器、检测器。;1. 选择性高，干扰少。共存元素对待测元素干扰少，一般不需分离共存元素。;原子吸收分光光度法与紫外可见吸收光度法异同点; 1. 在可见、紫外分光光度法中，吸光物质是溶液中被测物质的分子或离子对光的选择吸收，原子吸收光谱法吸光物质是待测元素的基态原子对光的选择吸收，这种光是由待测元素制成的空心阴极灯(称元素灯)作光源。;二、光谱分析技???在临床生物化学检验中的应用;（二）分光光度技术的定量方法;;制作和应用标准曲线时应注意下面几点：;2．比较法 ;3．其它分析方法;1．光学因素： 要求入射光是单色光。入射光的谱带越宽，其误差越大。 ;补充 分光光度计的基本结构;;（一）光源;（二）单色器;入射狭缝;熔融石英;;（五）显示器;分光光度计的操作方法;（二）吸光度的校正;第二节 电化学分析技术; 溶液的电化学性质是指电解质溶液通电时，其电位、电流、电导和电量等电化学特性随化学组分和浓度而变化的性质。;建立在溶液电化学性质基础上,并利用这些性质，通过电极这个变换器，将被测物质的浓度转变成电学参数而进行检测的方法。 ;;电位分析法的理论依据—— 能斯特方程 表示电极电位与溶液中对应离子活度之间存在的定量关系。;原电池：由指示电极和参比电极构成;离子选择电极分析法（ion selective electrode，ISE）是利用电极电位和离子活度的关系来测定被测离子活度的一种电化学分析法。 离子选择性电极分为——玻璃膜电极和敏化电极 带有对被测离子选择性响应的敏感膜，膜内外的离子活度的差异引起离子从高浓度向低浓度迁移，从而产生电位改变（电极电位）。 ;离子选择电极的结构;2. 电极电位 膜内外被测离子活度的不同而产生电位差。 3. 电极电位的测量 ISE与参比电极共同浸入样品试液中构成一个原电池，通过测量原电池的电动势E，便可求得被测离子的活度或浓度。 ; 离子选择性电极作正极时： 对阳离子响应的电极，取正号； 对阴离子响应的电极，取负号。;离子选择性电极的电极电位表示为： ;（一）常用的离子选择电极 1. 玻璃膜电极 敏感膜由玻璃材料制成，是发现较早的ISE。由于其敏感膜的组成不同，现已有pH、Na+、K+ 、Li+、Ag+ 、 Ca2+、iCa2+、Mg等玻璃电极。分为固态和液态两种。Na+电极就是利用玻璃膜对离子的选择性透过制成的固态电极；而K+电极是在聚乙烯膜上结合缬氨霉素制成的液态电极。 ;2. 气敏电极