1.1DNA重组技术的基本工具(修改版).ppt

每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。;基因工程;基因工程的概念：;;问题探讨：;基因工程培育抗虫棉的简要过程：;基因工程培育抗虫棉的关键步骤：;识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。;为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？; 限制酶所识别的序列的特点: 无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 图1-1 限制酶识别序列的中心轴线;EcoRI限制酶的切割：只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。; 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。; 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。;;1;考点一：限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用;二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶;常用类型;DNA连接酶与DNA聚合酶的比较;三、 “分子运输车” —基因进入受体细胞的载体：;质粒：;③作为载体的必要条件：;质粒：;3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？;1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。; 提醒 ①一般来说,天然载体往往不能满足人类的 所有要求,因此人们根据不同的目的和需要,对某 些天然的载体进行人工改造。 ②常见的标记基因有抗生素基因、产生特定颜色 的表达产物基因、发光基因等。 ③作为载体必须具有多个限制酶切点,而且每种酶 的切点最好只有一个。因为某种限制酶只能识别 单一切点,若载体上有一个以上的酶切点,则切割 重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制起 点区,则进入受体细胞后便不能自主复制。; 一个载体体若只有某种限制酶的一个切点,则酶切后既能把环打开接纳外源DNA片段,又不会丢失自己的片段。 ④注意与细胞膜上载体的区别,两者的化学本质和作用都不相同。 ⑤质粒能自我复制,既可在自身细胞、受体细胞也可在体外复制。;考点二：质粒的结构与功能 【典例2】如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。 （1）a代表是物质和质粒的化学本质相同，都是 ，二者还具有其他共 同点，如① ，② 。 （2）若质粒DNA分子的切割末端为，则与之连接的目的基因切割末端应为 ；可使用 把质粒和目的基因连接在一起。 （3）氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上称为 ，其作用是 。 （4）下列常在基因工程中用为载体的是 （ ） A．苏云金芽孢杆菌抗虫基因 C．大肠杆菌的质粒 B．土壤农杆菌环状RNA分子 D．动物细胞的染色体