肝门静脉插管.doc

动物麻醉（异氟醚或氯胺酮/赛拉嗪混合物）。2.托吡卡胺滴眼以防眼睛干燥。 4. 5. 背部及腹部脱毛，碘伏和酒精擦拭。 回结肠静脉插管需3.5cm。固定两端。 7. 用止血钳和镊子将大头针垂直取下，将导管连接至19g针，用生理盐水冲管。 固定手术窗。 切开腹部皮肤3-5cm。 11定位盲肠和紧邻的沿大网膜下缘走行的横结肠，分离并用纱布定位。分离回结肠静脉。 放入结扎线，两端用止血钳固定。13. 14. 插管（45度）。 结扎管，通管。 17.18.19.将脏器放回腹腔缝合皮肤。 20.21.22.23.将管固定至背部，缝合皮肤。 通管，缝合背部，装入大头针。实验前观察3-5天。 小鼠灌注固定方法：1、采用水合氯醛麻醉后剪开胸腔，动作要快，经左心室插入头皮针连接的20ml注射器，（头皮针磨钝，从以身体纵轴45度角方向进针，针尖插入升主动脉内，可以看见，动作要轻柔）同时剪开右心儿，推入20ml 生理盐水推完以后迅速的换4 度多聚甲醛20ml，灌完以后取材基本就可以了，从你所说的情况看，1、你推生理盐水时没有把血液冲洗干净2、推的压力过大，将小的毛细血管冲破了3、有血时可以用H2O2补救一下4、双侧颈总动脉结扎的小鼠灌注时压力就更不能太大，要细水长流，一般正常的推注速度，没有阻力，就可以了，最好两个人合作一下比较好，我们这边灌注固定不论小鼠，大鼠的效果都很好。可以进一步交流 3.如位置正确会有白色液体从鼻孔流出扎穿右心室才会有灌注液从鼻孔流出,这样浪费液体，灌注效果也不好从心尖进，刺穿心室壁有漏空感即可,切不可盲目追求像大鼠一样深入升主动脉,剪开右心耳时小心伤到主动脉要是冲血比较顺利的话，肝脏会迅速变白,如呈肉色再浅些就可以了,这是一个标志,冲血嘛,看着肝脏变化就差不多了,顺利的话一般30ml左右一定能冲的干净.我们是拿0.01M PBS(pH=7.4)来冲血的,pH值一定要准确，否则老鼠会抽,还有就是麻药的问题，过浅过深都会影响灌注的效果.开始冲血的液体，无论是PBS还是生理盐水,都要温热的，因为如果太冷,会使血管收缩痉挛,影响灌注效果，我一般都是调好pH值封好放到烤箱里过一夜.灌注液是保存在4度的.如果血实在是影响的话，可以拿0.3%双氧水30分钟处理一下估计还是操作的问题，可以请教实验室的人带你做一次