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人维生素B6[VB6]ELISAKit.docx

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北京奇松生物科技有限公司 网址: HYPERLINK  产品名称:人维生素B6(VB6)ELISA Kit 英文名称:Human Vitamin B6,VB6 ELISA Kit 产品分类:人代谢相关酶联免疫吸附测定试剂盒[ELISA Kit for Human metabolism] 检验方法:ELISA 包装:96T 人维生素B6(VB6)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA 法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中VB6 含量。 实验原理 用纯化的VB6 抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的VB6 抗体、 HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并 在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的VB6 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定 吸光度( 值),计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1、酶标板:一块(96 孔) 2、标准品(冻干品): 2 瓶,请临用前15 分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml,盖好后室温静 置大约10 分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 nmol/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直 接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 nmol/L,100 nmol/L,50 nmol/L,25 nmol/L,12.5 nmol/L,6.25 nmol/L,3.12 nmol/L,样品稀释液直接作为空白孔0 nmol/L。如配制100 nmol/L 标准品:取0.5ml (不 要少于0.5ml )200 nmol/L 的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf 管中,混匀即可,其余 浓度以此类推。 3、样品稀释液:1×20ml。 4、检测稀释液A:1×10ml。 5、检测稀释液B:1×10ml。 6、检测溶液A:1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液A 1:100 稀释(如:10 检测溶液A / 990 检 测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100 /孔),实际配制时应 多配制0.1-0.2ml。 7、检测溶液B:1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶液A。 8、底物溶液:1×10ml/瓶。 9、浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10、终止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。 11、覆膜:5 张 12、使用说明书:1 份 自备物品 1、酶标仪(建议仪器使用前提前预热) 2、微量加液器及吸头,EP 管 3、蒸馏水或去离子水,滤纸 标本的采集及保存 1、血清:全血标本请于室温放置2 小时或4 过夜后于1000 g 离心20 分钟,取上清即可检测,或将上清 置于-20 或-80 保存,但应避免反复冻融。 2、血浆:可用EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后30 分钟内于1000 g 离心15 分钟,取上清即可检 测,或将上清置于-20 或-80 保存,但应避免反复冻融。 3、其它生物标本:请1000 g 离心20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 或-80 保存,但应避免 反复冻融。 注:以上标本均应密封保存,4 保存应小于1 周,-20 不应超过1 个月,-80 不应超过2 个月;标本溶血 会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在37 溶解;试剂或样品配制时,均需充分混匀,混 匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品 符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。 1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100 ,余孔分别加标准品或待测 样品100 ,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板 加上盖或覆膜,37 温育2 小时。为保证实验结果有效 性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2、弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A 工作液100 (临用前配制),酶标板加上覆膜,37 温 育1 小时。 3、弃去孔内液体,甩干,洗板3 次,每次浸泡1-2 分钟,大约400 /每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体 拍干)。 4、每孔加检测溶液B 工作液(临用前配制)100 ,加上覆膜,37 温育1 小时。 5、弃去孔内液体,甩干,洗板5 次,方法同步骤3。 6、每孔加底物溶液90 ,酶标板加上覆膜37 避光显色(反应时间控制在15-30 分钟,当标准孔的前3-4 孔有明显的梯度

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