核酸类检测试剂盒.docx

临床核酸类(DNA/RNA)检测试剂盒应用及推广 乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒（HCV）、人类免疫缺陷综合症病毒(HIV)是对构成对人类构成严重威胁的主要病毒，乙肝是由HBV引起的，全球约有3.5亿HBV携带者，占总人口5%，其中亚洲和非洲所占比例较重。我国是病毒性肝炎的高发区，平均年发病率为120-140/10万。中国有1.2亿乙肝携带者，占全球的1/3，其中约1/4将发展为慢性肝病，部分患者可发展为肝硬化，甚至演变为肝癌。 丙型肝炎是由HCV引起的，HCV慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC)，据WHO统计，全球HCV感染率约为3%，估计全球有1.7亿人感染HCV，是HBV携带者人数的50%，HIV感染者的5倍。HCV携带者在我国较HBV（乙肝）携带者为少，在健康人群中抗HCV阳性率为0.7%-3.1%。 艾滋病是由HIV引起的,截止2004年底，全球约有3940万人感染HIV/艾滋病，其中95%生活在发展中国家，到2010年前，世界126个中、低收入国家还将有4500万人感染艾滋病病毒，其中40%在亚洲和太平洋地区。2003年底，我国有48%的县报告了HIV/AIDS，现存HIV/AIDS约84万，全人群感染率为0.07%。由于HIV、HCV、HBV有相似的传播途径，因此，共感染情况比较常见。 相关的临床或实验室诊断方法：目前，临床实验室诊断方法主要是酶联免疫检测（EIA）。随着第三代乃至第四代EIA试剂的出现，显著增加了筛查和检测的灵敏度，在很大程度上减少了血源传播病毒性疾病发生的概率。例如在美国，HCV的感染率已从80年代的每年大约180000例，减少到现在的每年大约30000例。新感染的减少主要是由于在1990年引入了丙型肝炎病毒输血EIA筛查以及此后几年EIA试剂的更新换代。目前在美国，存在被当前的血清学检测方法所遗漏的HCV阳性供体比例大约为1:103000，相应的比例在德国为1:200000，在英国为1:250000 。在发展中国家，被当前的血清学检测方法所遗漏的HIV阳性供体比例约为1-2百万分之一，HBV 阳性供体的感染风险则最高，达十万分之一。我国也于九十年代初在全国血站中开始对献血员进行HCV、HBV、HIV酶联免疫法检验，有力地控制了输血相关病毒的感染。EIA方法具有简便、快速、成本低、适于大量样品同时检测的优点，但究其???法学而言，检测的是间接的免疫指标而非病毒本身，如HCV抗体、HIV抗体的筛查，检测的是机体在病毒入侵后产生的抗体，在时间上具有滞后性，即所谓的窗口期漏检，所以血清学诊断方法存在其固有的缺限。窗口期长短随机体免疫机能不同存在个体差异，有少数感染者感染后机体所产生的抗体滴度有可能低于免疫学检测线以下，甚至不产生抗体。一般认为，HCV的窗口期约为66-82天，HBV和HIV的窗口期分别是大约59天和22天。由于核酸检测(nucleic acid testing，NAT)技术是迄今为止检测病毒的最灵敏的方法,直接检测病毒核酸，能够检出标本中极微量的病毒核酸，在病毒感染后数天内即可检出病毒核酸，大大缩短了窗口期,降低血源性病毒的传播危险。根据研究报道：NAT可将HBV、HCV、HIV感染的平均窗口期分别缩短25－30天(缩短窗口期42%－50%)、57－59天(72%－89%)和10－11天(50%)，并可检出上述其他原因而漏检的血液。 （一）荧光定量PCR对HBV DNA检出的临床意义 1. 判断疾病的严重程度和传染性 HBV DNA是直接反映HBV复制状态及传染性的最佳指标。 2. PCR结果与血清免疫学结果的综合评价 随着现代医学的检测技术的发展，采用基因扩增技术（PCR）检测对HBV-DNA进行乙肝病毒DNA定性和定量，结合二对半检测结果，对于机体乙肝病毒感染状态尤变异株发生和病人预后的评估更为科学。 3. 观察抗病毒药物疗效，指导药物用量 直接检测血清中的HBV DNA是监控HBV传染和观察抗病毒药物疗效的最可靠的方法。根据《2000年拉米夫定临床应用指导意见》，中国慢性乙型肝炎病人治疗的目的主要就是降低血清HBV DNA，诱导HBeAg血清转换，使ALT正常化，改善肝脏组织学病变，改善疾病症状、体征，提高生活质量，降低肝硬化和肝癌的发生率。同时血清的HBV DNA滴度的动态变化还可在临床上对用药的剂量、用药时间以及是否需要联合用药等提供参考。 4. 献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断 HBsAg 在血清中的检出通常在乙肝病毒感染机体后的2-4月出现，平均为56天左右。而HBV DNA的检出可以将该所谓“窗口期”提前6-15天，对于早期诊断和提高输血安全有着重要的意义。 5. 预测病情、判断预后 HBV DNA的定量检出